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血清是細(xì)胞培養(yǎng)過程中常用的生物試劑,市面上有很多種類的血清,現(xiàn)在就來給大家介紹其中的一款——透析胎牛血清。透析胎牛血清是采用透析的方法,過濾去除10KDa以下的小分子(如氨基酸、核苷:次黃嘌呤和胸腺核苷等、膽固醇等),而保留血清中的大分子成分,因而可用于一些特定的細(xì)胞實(shí)驗(yàn),比如:需要避免細(xì)胞培養(yǎng)基中一些小分子干擾的實(shí)驗(yàn)。使用放射性標(biāo)記小分子,對(duì)生物合成過程進(jìn)行監(jiān)測(cè),以研究蛋白質(zhì)等大分子的生化性質(zhì)、合成、加工、細(xì)胞內(nèi)傳送、分泌和降解過程。這時(shí),常將細(xì)胞放在含有充足養(yǎng)分和放射性標(biāo)記氨基酸(如35S標(biāo)記的蛋氨酸或半胱氨酸)的培養(yǎng)液中進(jìn)行標(biāo)記。為避免外源未標(biāo)記的氨基酸的干擾,這時(shí)所用的血清就是透析胎牛血清,不含蛋氨酸和半胱氨酸,基礎(chǔ)培養(yǎng)基也要求不含蛋氨酸和半胱氨酸。胎牛血清是由血漿去除纖維蛋白而形成的一種很復(fù)雜的混合物。海門優(yōu)級(jí)胎牛血清 Fetal Bovine Serum(Characterized)
胎牛血清(FetalBovineSerum,F(xiàn)BS)是一種取自牛胚胎的血清,常用于配置動(dòng)物細(xì)胞的培養(yǎng)基。胎牛血清中含有生長因子等蛋白質(zhì),且抗體含量少。細(xì)胞生物學(xué)的研究人員通常會(huì)在培養(yǎng)基中加入一定比例的胎牛血清,以幫助維持體外培養(yǎng)(invitro)的細(xì)胞的存活。但胎牛血清的組成復(fù)雜多變,研究人員一般將其視作成分不明的混合物,認(rèn)為其可能增加實(shí)驗(yàn)結(jié)果的不確定性。如何儲(chǔ)存和解凍血清才不會(huì)使產(chǎn)品質(zhì)量受損?將血清從冷凍箱取出后,先置于2~8℃冰箱使之融解,然后在室溫下使之全融。但必須注意的是,融解過程中必須規(guī)則地?fù)u晃均勻。長時(shí)間儲(chǔ)存在2-8℃時(shí),血清中的各種蛋白和脂蛋白(如冷凝集素、纖維蛋白原、玻粘連蛋白等)可能聚集而形成沉淀或可見的混濁。因此,推薦在-20℃以下儲(chǔ)存血清,并避免反復(fù)凍融。我們建議血清應(yīng)保存在-2O℃。若存放于4℃時(shí),請(qǐng)勿超過一個(gè)月。若一次無法用完一瓶,建議無菌分裝血清至恰當(dāng)?shù)臏缇萜鲀?nèi),再放回冷凍。溧陽DMEM 培養(yǎng)基(高糖,無酚紅)胎牛血清有些情況下結(jié)合蛋白質(zhì)能與有毒金屬和熱原質(zhì)結(jié)合,起到消毒作用。
胎牛血清的保存方法:1、需要長期保存的胎牛血清須儲(chǔ)存于-20℃-70℃低溫冰箱中。4℃冰箱中保存時(shí)間切勿超過1個(gè)月。切勿將血清在37℃放置太久,否則血清會(huì)變得渾濁,同時(shí)血清中的有效成分會(huì)被破壞,而影響血清質(zhì)量。如果一次無法用完一瓶,可將40~45ml分裝于無菌50ml離心管中。由于血清結(jié)冰時(shí)體積會(huì)增加約10%,因此,血清在凍入低溫冰箱前,必須預(yù)留一定體積空間,否則易發(fā)生污染或玻璃瓶凍裂。2、一般廠商提供的血清為無菌,無需再過濾除菌。如發(fā)現(xiàn)血清有懸浮物,則可將血清加入培養(yǎng)液內(nèi)一起過濾,切勿直接過濾血清。3、胎牛血清解凍需采用逐步解凍法:-20℃至-70℃低溫冰箱中的血清放入4℃冰箱中溶解1天.然后移入室溫,待全部溶解后再分裝,一般以50ml無菌離心管可分裝40~45ml。在溶解過程中須規(guī)則搖晃均勻(小心勿造成氣泡),使溫度與成分均一,減少沉淀的發(fā)生。切勿直接將血清從-20℃進(jìn)入37℃解凍,這樣因溫度改變太大,容易造成蛋白質(zhì)凝集而出現(xiàn)沉淀。
小牛血清和胎牛血清有何區(qū)別與注意事項(xiàng)?來源不同:胎牛血清(FetalBovineSerum,F(xiàn)BS)是在屠宰懷孕母牛的時(shí)候,通過心臟穿刺采集血液獲取的胎牛的血清,新生牛(小牛)血清(Calfserum,CS)采自出生10至14天的小牛。組份與比例不同:兩者所含的促細(xì)胞生長因子、促貼附因子、元素及其他活性物質(zhì)等組份與比例不同,用途與用法不同:某些細(xì)胞必需胎牛血清才能生長,而有些細(xì)胞只需小牛血清即可,使用濃度不同,一般在5%-10%,有特殊要求的濃度在20%。血清保存和使用須注意:血清應(yīng)保存在-5℃至-20℃,若存放在4℃不可超過一個(gè)月。解凍血清時(shí),應(yīng)先將血清至于2-8℃冰箱,并經(jīng)常搖勻使之溶解,然后至室溫放置使之升溫,基本不可將冷凍的血清直接放入37℃水浴或者溫箱中,如放在37℃解凍,顏色加深,粘稠度也會(huì)增加,血清在解凍和熱滅活后,應(yīng)按用量分裝并于-20℃保存,避免反復(fù)凍融。胎牛血清促細(xì)胞生長因子、促帖附因子、元素及其他活性物質(zhì)等組分也不同于其他幾類血清。
什么是優(yōu)良的胎牛血清?免疫球蛋白,國產(chǎn)血清的只是定性檢測(cè),結(jié)果也很不準(zhǔn)確,進(jìn)口胎牛血清大多定量檢測(cè)。免疫球蛋白的數(shù)值能完全體現(xiàn)出采集血液的時(shí)的牛齡情況,國產(chǎn)血清,基本都是新生牛的,血清中容易產(chǎn)生IgM,IgG的含量也偏高,進(jìn)口胎牛血清,不含IgM,IgG的含量也較低。維生素含量,此外,維生素的使用也是要考慮在內(nèi)的。國內(nèi)外的血清,都不對(duì)維生素進(jìn)行測(cè)試(無四環(huán)素胎牛血清理外)。其中,由于國外維生素使用較為嚴(yán)格,用量有限,同時(shí)每頭奶牛的產(chǎn)品包括血清都可以追溯源頭,所以國外胎牛血清不含維生素或者含量極低。但是國內(nèi)由于維生素使用普遍,血清中殘留量很高,導(dǎo)致國產(chǎn)血清質(zhì)量很差,不利于細(xì)胞培養(yǎng)。胎牛血清含有豐富的細(xì)胞生長必需的營養(yǎng)成份,常用于動(dòng)物細(xì)胞的體外培養(yǎng)。泰興Bouin's固定液
胎牛血清:母牛懷孕3-8個(gè)月時(shí),采用剖腹心臟密閉穿刺取血。海門優(yōu)級(jí)胎牛血清 Fetal Bovine Serum(Characterized)
胎牛血清(FoetalBovineSerum,簡稱FBS):是采自5-8個(gè)月胎齡牛胚胎中的胎血。此時(shí)胎牛各臟器正處生長分化階段,血中含有豐富的生長發(fā)育因子,非常適合各種細(xì)胞的培養(yǎng),一旦胚胎發(fā)育完全這些因子自動(dòng)消失。因此8個(gè)月胎齡以上的牛胚胎,已接近足月,不能作為胎牛血清的原料來使用。有下列情況者,對(duì)血清內(nèi)有害元素應(yīng)格外留意篩選:1.養(yǎng)干細(xì)胞時(shí),干細(xì)胞對(duì)內(nèi)有害元素非常敏感,如果血清中內(nèi)有害元素≥3EU/ml時(shí),干細(xì)胞很容易死亡。很多使用者,在血清在試用前,就通過提早審核該批次《檢測(cè)報(bào)告》,以決定是否入圍進(jìn)行試用。2.養(yǎng)免疫細(xì)胞時(shí),過高的內(nèi)有害元素可誘導(dǎo)免疫細(xì)胞釋放炎癥因子,抑制小鼠紅細(xì)胞集落的形成等。3.基因敲除相關(guān)的細(xì)胞實(shí)驗(yàn),培養(yǎng)的細(xì)胞要盡可能保持其原始狀態(tài),任何引導(dǎo)細(xì)胞衰老或凋亡的試劑,都會(huì)讓后續(xù)的實(shí)驗(yàn)結(jié)果“失之毫厘,謬以千里”。在準(zhǔn)備血清和其他試劑時(shí),選擇極低的內(nèi)有害元素(更好≤1EU/ml),對(duì)實(shí)驗(yàn)至關(guān)重要。海門優(yōu)級(jí)胎牛血清 Fetal Bovine Serum(Characterized)
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