如今已經成為各大實驗室“??汀钡奶ヅQ澹且环N采集自新鮮的牛血液的優(yōu)良血清。胎牛血清主要的作用就是提供基本的營養(yǎng)物質以及提供接觸和伸展因子,有效避免細胞貼壁受到機械的損傷。如此看來胎牛血清確實發(fā)揮出非常大的作用,那么為了讓其充分發(fā)揮更大的價值該注意哪些事項呢?注意避免沉淀加入培養(yǎng)液,添加胎牛血清的時候要注意避免把沉淀加入培養(yǎng)液,因為如果培養(yǎng)液有沉淀的存在,會使得其中培養(yǎng)的細胞產生大量的黑點,除此之外,細胞的表面還很可能會覆蓋一層油狀物質,總之出現這樣的情況會極其不利于細胞的正常生長。那么為了更大程度減少血清的損失,可以把所有有沉淀的血清進行收集并做離心處理,之后便可將上清液加入培養(yǎng)液中使用。胎牛血清應取自剖腹產的胎牛;新牛血清取自出生24小時之內的新生牛。高郵RPMI 1640 Medium
為什么使用胎兒血清而不是新生兒血清或成人血清?胎兒血清含有較多的生長因子,丙種球蛋白(即抗體)含量較低,非胎兒血清也有。這些很重要,因為生長因子促進細胞存活和增殖,而抗體可以與培養(yǎng)的細胞結合。此外,與成人或新生兒相比,胎兒血清中的補體蛋白(補體)含量較低。這些補體具有溶解培養(yǎng)細胞和干擾免疫測定的不良作用。血清和血漿均來自全血,通過離心去除包括紅細胞在內的成分。血漿和血清之間的區(qū)別在于,凝血蛋白存在于血漿中,但已從血清中去除。血漿一般是通過在離心前向血液中加入抗凝劑來制備的,但不會去除凝血蛋白。通過在離心前使血液凝固或通過普遍/漸進離心來制備血清。因此,與凝血相關的纖維蛋白原和蛋白質不存在于血清中。揚中優(yōu)級胎牛血清 Fetal Bovine Serum(Characterized)胎牛血清提供維持細胞指數生長的激元素、基礎培養(yǎng)基中沒有或量很少的營養(yǎng)物。
牛血清是細胞培養(yǎng)中用量更大的天然培養(yǎng)基,含有豐富的細胞生長必須的營養(yǎng)成份,常用于動物細胞的體外培養(yǎng),具有極為重要的功能。提供對維持細胞指數生長的元素、基礎培養(yǎng)基中沒有或量很少的營養(yǎng)物,以及主要的低分子營養(yǎng)物;提供結合蛋白,能識別維生素、脂類、金屬和其他元素等,能結合或調變它們所結合的物質活力;有些情況下結合蛋白質能與有毒金屬和熱原質結合,起到消毒作用;是細胞貼壁、鋪展在塑料培養(yǎng)基質上所需因子來源;起酸堿度緩沖液作用;提供蛋白酶抑制劑,使在細胞傳代時使剩余胰蛋白酶失活,保護細胞不受傷害。
胎牛血清(FetalBovineSerum,FBS)是指在健康母牛正常分娩前采集胎牛血液加工而成的血清,由于血清采集時間早,其胎球蛋白較多,血清白蛋白含量高,而γ-球蛋白含量極低,并富含多種生長因子,因此,是培養(yǎng)細胞更為優(yōu)良的牛血清。牛血清的成分復雜,主要包含蛋白質、多肽、元素、氨基酸、葡萄糖等多種營養(yǎng)成分。雖然其中大部分成分已為人知,但還有一部分也還不清楚,而且其組分及含量常依動物性別、年齡、生理狀態(tài)、營養(yǎng)條件不同而有差異。血清理含有促進細胞生長的成分外,同時含有內有害元素、血色素、補體、抗體等其他有害成分,影響細胞生長甚至導致細胞死亡,因此,通常需要測試工作才知道對細胞生長的效果。低質量的血清常被病毒、菌體和支原體等微生物傳染,導致細胞培養(yǎng)失敗,浪費了科研人員的時間和精力。胎牛血清可以提供細胞生長所需的天然元素或天然的生長因子。
胎牛血清是妊娠后期剖腹取出的胎牛血清。胎牛血清營養(yǎng)成分完全而豐富,代謝產物極少,微生物傳染的可能性更小,品質更高,是組織細胞培養(yǎng)和病毒增殖時的重要營養(yǎng)來源。在細胞培養(yǎng)過程中,經常加入5%-20%的胎牛血清(澳洲),更常使用的胎牛血清(澳洲)濃度是10%。高濃度的血清可能改變細胞的基因表達譜,影響后續(xù)實驗的結果,在實驗中使用10%的澳洲胎牛血清培養(yǎng)293T細胞,效果非常好。但是有些細胞也會使用5%的胎牛血清(澳洲)或者20%的胎牛血清(澳洲),要根據具體細胞選擇合適的胎牛血清(澳洲)濃度。胎牛血清全程冷鏈運輸,無凍融現象。揚州天狼星紅染色試劑盒
胎牛血清是一種性狀、外觀淺黃色澄清、無溶血、無異物稍粘稠液體。高郵RPMI 1640 Medium
什么是優(yōu)良的胎牛血清?外觀,好的血清應是透明清亮,土黃色或棕黃色,無沉淀或極少沉淀,比較粘稠。如發(fā)現血清渾濁,不透明,含許多沉淀物,說明血清污染或血清中的蛋白質變性;若棕紅色,說明血清中的血紅蛋白含量太高,有溶血現象??偟鞍缀浚ヅQ逡话惴秶?0-40mg/ml,數值偏高,說明采集血液的牛齡偏大,不是胎牛;數值偏低,表明血清可能摻水了。血紅蛋白,標準為不高于20mg/dl,顏色越紅,數值越高;反之,數值越低。pH,國產血清,大多高于7.5,進口胎牛血清,大多低于7.5,具體原因未知,可能和牛齡有關,這也能用來初步鑒別血清的來源。高郵RPMI 1640 Medium
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