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深圳蛋白質(zhì)定量組學一般流程

來源: 發(fā)布時間:2022-05-06

蛋白質(zhì)組學在醫(yī)療和健康方面有什么應用?作為主要研究策略的蛋白質(zhì)組學:這與題目中的描述更相關些,蛋白質(zhì)組學是研究中的關鍵方法(甚至是唯1方法)。具體而言,蛋白質(zhì)組學在此類應用中,更多地用于提供高通量蛋白質(zhì)定性定量信息。作為檢測手段的蛋白質(zhì)組學:事實上,在當前的生物醫(yī)學Q研究和臨床診斷中,蛋白質(zhì)組學相關技術有非常多的應用。因為蛋白質(zhì)組學技術的本質(zhì)(從分析化學角度來看),就是對蛋白質(zhì)的定性定量分析。生物醫(yī)學和臨床診斷中,需要大量表征一種或多種蛋白質(zhì)的含量、氨基酸序列、翻譯后修飾等信息。蛋白質(zhì)組學相關技術目前在一小部分應用中具有獨特優(yōu)勢。有很多蛋白質(zhì)組學的研究者在工業(yè)界和醫(yī)院進行相關研究和日常工作。有很多蛋白質(zhì)組學的研究者在工業(yè)界和醫(yī)院進行相關研究和日常工作。深圳蛋白質(zhì)定量組學一般流程

蛋白質(zhì)組研究內(nèi)容:1.蛋白質(zhì)鑒定:可以利用一維電泳和二維電泳并結合Western等技術,利用蛋白質(zhì)芯片和抗體芯片及免疫共沉淀等技術對蛋白質(zhì)進行鑒定研究。2.翻譯后修飾:很多mRNA表達產(chǎn)生的蛋白質(zhì)要經(jīng)歷翻譯后修飾如磷酸化,糖基化,酶原刺激等。翻譯后修飾是蛋白質(zhì)調(diào)節(jié)功能的重要方式,因此對蛋白質(zhì)翻譯后修飾的研究對闡明蛋白質(zhì)的功能具有重要作用。基-受體結合分析??梢岳没蚯贸头戳x技術分析基因表達產(chǎn)物-蛋白質(zhì)的功能。另外對蛋白質(zhì)表達出來后在細胞內(nèi)的定位研究也在一定程度上有助于蛋白質(zhì)功能的了解。哈爾濱常規(guī)蛋白質(zhì)組學主要技術對人類而言,蛋白質(zhì)組學的研究終究要服務于人類的健康。

Label Free 非標記定量蛋白質(zhì)組學技術優(yōu)點:無需標記,比較大程度的保留樣本的真實性;可以區(qū)分“有”、“無”蛋白;不受標簽數(shù)量的限制,多個樣本可以同時進行蛋白定量分析;不同物種和不同的樣本類型可以同時開展蛋白定量分析;處理步驟簡單,成本低。 DIA 定量蛋白質(zhì)組學:數(shù)據(jù)非依賴性采集(DIA)是一種明顯提升蛋白質(zhì)組學研究通量和可重復性的技術。經(jīng)典的 DIA 流程通常依賴于 DDA 譜圖庫的構建,需要消耗大量的樣品,且周期長,成本高。越來越多的不依賴于 DDA 建庫的分析方法相繼誕生。

PRM靶向蛋白組學:PRM技術是一種根據(jù)已知實測信息或質(zhì)譜檢測規(guī)律的假定信息對樣品中的蛋白質(zhì)進行靶向定量的技術。該技術主要應用儀器為QExactive系列質(zhì)譜儀,首先以四極桿作為質(zhì)量過濾器,特異性地選擇與預先設定質(zhì)荷比相同的肽段離子(母離子)通過,隨后在高能碰撞池中碎裂母離子,之后通過Orbitrap分析碎片離子(子離子)得到肽段的二級質(zhì)譜信息。四極桿的高選擇性離子過濾與Orbitrap高分辨率測量技術的結合使得PRM技術有很高的特異性,并且有效的降低了背景噪音,去除了干擾離子,提高了靈敏度。在確保數(shù)據(jù)質(zhì)量的前提下,為了在一次分析中檢測更多的蛋白質(zhì),可用預置PRM(ScheduledPRM,sPRM)的方法,這種方法需要知道每個肽段的保留時間信息,使得每個肽段只在其洗脫時間窗口內(nèi)執(zhí)行PRM檢測,很大程度上提高了檢測效率,可同時檢測上百種蛋白質(zhì)。PRM技術是目前應用較普遍的質(zhì)譜蛋白質(zhì)靶向定量技術。Label free定量蛋白組學技術是通過液質(zhì)聯(lián)用技術對蛋白質(zhì)酶解肽段進行質(zhì)譜分析。

蛋白質(zhì)組學研究策略:蛋白質(zhì)組學研究主要分為自底向上(Bottom-Up),自頂向下(Top-Down)和自中向下(Middle-Down)三種策略?!白缘紫蛏稀辈呗允侵竿ㄟ^分析由蛋白質(zhì)酶解生成的肽段來鑒定蛋白質(zhì)。當應用該策略來分析蛋白質(zhì)組混合物時,因其類似于基因組測序的鳥管法,所以又被稱為鳥管法蛋白質(zhì)組學(Shotgun Proteomics),該策略依賴于蛋白酶的酶切。“自中向下”策略也依賴于蛋白酶的酶切,但是由于采用了另外的酶,比如OmpT,只能酶切(Lys/Arg-Lys/Arg),因此酶切之后的分子量較大,更利于后續(xù)的蛋白組裝環(huán)節(jié)。定量蛋白質(zhì)組學是蛋白質(zhì)組研究的重要內(nèi)容。貴州新型修飾蛋白組學主要技術

蛋白質(zhì)組學可系統(tǒng)研究農(nóng)作物在特定環(huán)境或某個發(fā)育階段的組織中蛋白質(zhì)的表達變化。深圳蛋白質(zhì)定量組學一般流程

蛋白組學技術:蛋白質(zhì)組學研究的首要任務是建立獲取和分析蛋白質(zhì)的常規(guī)、可靠、有效的技術。為達到這一要求,就需要樣品準備、數(shù)據(jù)獲取標準化及自動化,也就是要有可重復的高通量的技術。蛋白質(zhì)組學技術手段在不斷完善,其工作流程,包括蛋白質(zhì)樣本的制備、分離、定量及鑒定。由雙向凝膠電泳、質(zhì)譜技術、酵母雙雜交系統(tǒng)、蛋白質(zhì)微陣列技術、能進行大規(guī)模數(shù)據(jù)處理的計算機系統(tǒng)和軟件、軟電離技術及生物信息學技術構成了蛋白質(zhì)組學研究的主要技術體系。其中蛋白質(zhì)組學技術中的質(zhì)譜技術是現(xiàn)在比較常用的一種蛋白質(zhì)鑒定技術。深圳蛋白質(zhì)定量組學一般流程