蛋白質(zhì)組研究內(nèi)容:1.蛋白質(zhì)鑒定:可以利用一維電泳和二維電泳并結(jié)合Western等技術(shù),利用蛋白質(zhì)芯片和抗體芯片及免疫共沉淀等技術(shù)對蛋白質(zhì)進行鑒定研究。2.翻譯后修飾:很多mRNA表達產(chǎn)生的蛋白質(zhì)要經(jīng)歷翻譯后修飾如磷酸化,糖基化,酶原刺激等。翻譯后修飾是蛋白質(zhì)調(diào)節(jié)功能的重要方式,因此對蛋白質(zhì)翻譯后修飾的研究對闡明蛋白質(zhì)的功能具有重要作用。基-受體結(jié)合分析??梢岳没蚯贸头戳x技術(shù)分析基因表達產(chǎn)物-蛋白質(zhì)的功能。另外對蛋白質(zhì)表達出來后在細胞內(nèi)的定位研究也在一定程度上有助于蛋白質(zhì)功能的了解。蛋白質(zhì)組的概念與基因組的概念有許多差別。上海新型修飾蛋白組學分析研究
蛋白質(zhì)組學技術(shù):電噴霧質(zhì)譜:ESI-MS是利用高電場使質(zhì)譜進樣端的毛細管柱流出的液滴帶電,在N2氣流的作用下,液滴溶劑蒸發(fā),表面積縮小,表面電荷密度不斷增加,直至產(chǎn)生的庫侖力與液滴表面張力達到雷利極限,液滴爆裂為帶電的子液滴,這一過程不斷重復使液滴非常細小呈噴霧狀,這時液滴表面的電場非常強大,使分析物離子化并以帶單電荷或多電荷的離子形式進入質(zhì)量分析器。ESI-MS從液相中產(chǎn)生離子,一般說來,肽段的混合物經(jīng)過液相色譜分離后,經(jīng)過偶聯(lián)的與在線連接的離子阱質(zhì)譜分析,給出肽片段的精確的氨基酸序列,但是分析時間一般較長。目前,許多實驗室兩種質(zhì)譜方法連用,獲得有意義的蛋白質(zhì)的肽段序列,設(shè)計探針或引物來獲得有意義的基因。隨著蛋白質(zhì)組研究的深入,又有多種新型質(zhì)譜儀出現(xiàn),主要是在上述質(zhì)譜儀的基礎(chǔ)上進行改進與重新組合。上海高通量蛋白質(zhì)組學質(zhì)譜分析DIA 定量蛋白質(zhì)組學的循環(huán)時間固定,掃描點數(shù)均勻,定量準確度高。
蛋白質(zhì)組學在醫(yī)療和健康方面有什么應(yīng)用?作為主要研究策略的蛋白質(zhì)組學:這與題目中的描述更相關(guān)些,蛋白質(zhì)組學是研究中的關(guān)鍵方法(甚至是唯1方法)。具體而言,蛋白質(zhì)組學在此類應(yīng)用中,更多地用于提供高通量蛋白質(zhì)定性定量信息。作為檢測手段的蛋白質(zhì)組學:事實上,在當前的生物醫(yī)學Q研究和臨床診斷中,蛋白質(zhì)組學相關(guān)技術(shù)有非常多的應(yīng)用。因為蛋白質(zhì)組學技術(shù)的本質(zhì)(從分析化學角度來看),就是對蛋白質(zhì)的定性定量分析。生物醫(yī)學和臨床診斷中,需要大量表征一種或多種蛋白質(zhì)的含量、氨基酸序列、翻譯后修飾等信息。蛋白質(zhì)組學相關(guān)技術(shù)目前在一小部分應(yīng)用中具有獨特優(yōu)勢。有很多蛋白質(zhì)組學的研究者在工業(yè)界和醫(yī)院進行相關(guān)研究和日常工作。
PRM靶向蛋白質(zhì)組學:產(chǎn)品分類:a.相對定量(目的同WB)。b.一定定量(目的同Elisa)。技術(shù)優(yōu)勢:(1)無需抗體,可直接對樣本中目標蛋白質(zhì)進行定量分析。(2)高特異性、準確度和靈敏度,靶向檢測目標蛋白對應(yīng)的多個unique肽段。(3)通量高,可以同時實現(xiàn)幾十個蛋白的定量檢測。樣本要求:動物及臨床組織標本100mg/sample,血清、血漿200μL/sample,細胞、微生物1×107cells/sample。應(yīng)用方向:驗證修飾和非修飾定量蛋白組學結(jié)果;目標蛋白相對定量和一定定量分析。蛋白質(zhì)組學屬于后基因組時代的科學研究,針對基因表達產(chǎn)物進行檢測與定量。在未來的發(fā)展中,蛋白質(zhì)組學的研究領(lǐng)域?qū)⒏悠毡椤?/p>
蛋白質(zhì)組學在生物學領(lǐng)域的研究中的應(yīng)用是怎樣的?研究對象涉及到生物體且生物體內(nèi)表達蛋白,理論上都可以應(yīng)用蛋白質(zhì)組學。蛋白質(zhì)組學是以研究生物體蛋白組成及其變化規(guī)律為目的的應(yīng)用科學。主要使用的儀器為液質(zhì)聯(lián)用高分辨率質(zhì)譜儀。詳細來說,蛋白質(zhì)組學包含許多分支:非標定量蛋白質(zhì)組學(定性研究生物體的蛋白組成),定量蛋白質(zhì)組學(對生物體蛋白表達含量進行測定),修飾蛋白質(zhì)組學(對蛋白質(zhì)翻譯后修飾進行檢測)及相互作用蛋白質(zhì)組研究(蛋白質(zhì)直接相互作用機制解析)等。蛋白質(zhì)組學屬于后基因組時代的科學研究,針對基因表達產(chǎn)物進行檢測與定量。因此更能反應(yīng)出生物體生理條件下的水平與狀態(tài)。蛋白質(zhì)組與基因組相對應(yīng),也是一個整體的概念。深圳蛋白質(zhì)組學服務(wù)
蛋白質(zhì)組學在應(yīng)用中,更多地用于提供高通量蛋白質(zhì)定性定量信息。上海新型修飾蛋白組學分析研究
Label-free非標記的定量蛋白質(zhì)組學:定量不需要標記處理,操作簡單,可以做任意樣本的總蛋白質(zhì)差異定量,但對實驗操作的穩(wěn)定性、重復性要求較高,準確性也較標記定量差。因此,Label-free技術(shù)適合于大樣本量的定量比較,以及對無法用標記定量實現(xiàn)的實驗設(shè)計。iTRAQ標記的定量蛋白質(zhì)組學:iTRAQ定量是目前定量蛋白質(zhì)組學應(yīng)用比較普遍的技術(shù), 該技術(shù)的關(guān)鍵原理是多肽標記和定量,將多肽的含量轉(zhuǎn)化為114、115、116和117同位素的含量(或113、114、115、116、117、118、119和121的8標記),從而簡化了定量的復雜性,之后通過多肽定量值回歸到蛋白的定量值,從而測定出不同樣本之間蛋白質(zhì)的差異。上海新型修飾蛋白組學分析研究