蛋白質(zhì)組學(xué)有什么用,能給我實(shí)驗(yàn)帶來什么?可以大規(guī)模鑒定特定組織、細(xì)胞等各種樣本的蛋白質(zhì)種類、修飾狀態(tài)以及蛋白質(zhì)之間的相互作用,以及對這些蛋白質(zhì)功能分析、分類;可以對不同條件下某一特定樣本進(jìn)行大規(guī)模的蛋白質(zhì)(包括翻譯后修飾蛋白)表達(dá)量變化分析,篩選潛在biomarker,篩選重要信號通路;依托大樣本量,可以實(shí)現(xiàn)疾病的分子分型分析、重要潛在靶標(biāo)鑒定。質(zhì)譜的蛋白質(zhì)組學(xué)和芯片哪個(gè)更好出結(jié)果?若有對應(yīng)物種的全基因組并有預(yù)測的全蛋白序列庫,可優(yōu)先選擇全蛋白序列庫;若無全蛋白序列庫,有對應(yīng)物種對應(yīng)組織的轉(zhuǎn)錄組測序結(jié)果并,可以使用轉(zhuǎn)錄組的測序結(jié)果(mRNA三框翻譯或者預(yù)測CDS,并翻譯成氨基酸序列);若基因組、轉(zhuǎn)錄組數(shù)據(jù)庫都沒有,優(yōu)先選擇同源性比較接近的物種的全蛋白數(shù)據(jù)庫,若近源物種沒有合適的全蛋白庫,則選擇更大的蛋白全庫(如動(dòng)物全庫、綠色植物全庫、微生物庫等)。蛋白質(zhì)組的研究能為眾多種疾病機(jī)理的闡明及攻克提供理論根據(jù)和解決途徑。哈爾濱外泌體蛋白質(zhì)組學(xué)研究內(nèi)容
我們究竟怎么研究蛋白質(zhì)組學(xué)呢?目前高通量檢測蛋白質(zhì)的方法中,還是首推基于質(zhì)譜的方法,納流液相可以將復(fù)雜樣品中的肽段高效地分離,然后依次進(jìn)入質(zhì)譜,對每個(gè)被離子化的肽段及其碎裂后碎片的荷質(zhì)比進(jìn)行分析,從而得到該肽段的序列信息,然后根據(jù)對應(yīng)的色譜峰面積或者報(bào)告離子強(qiáng)度等信息,我們又可以得到該肽段的定量信息。蛋白組學(xué)研究怎么做?當(dāng)下蛋白組學(xué)研究中應(yīng)用比較普遍的技術(shù)是同位素標(biāo)記定量(iTRAQ/TMT技術(shù))。iTRAQ/TMT技術(shù)是利用DDA掃描模式,其掃描的方式是將一級質(zhì)譜信號比較強(qiáng)的Top20的多肽進(jìn)行二級打碎,然后進(jìn)入二級質(zhì)譜進(jìn)行檢測。其優(yōu)勢是二級譜圖采集的肽段信息都來源于同一條多肽,有利于后續(xù)的定性分析。浙江定量N糖基化蛋白質(zhì)組學(xué)研究內(nèi)容蛋白質(zhì)組學(xué)現(xiàn)已被普遍應(yīng)用于生命科學(xué)研究領(lǐng)域。
蛋白質(zhì)組研究內(nèi)容:1.蛋白質(zhì)鑒定:可以利用一維電泳和二維電泳并結(jié)合Western等技術(shù),利用蛋白質(zhì)芯片和抗體芯片及免疫共沉淀等技術(shù)對蛋白質(zhì)進(jìn)行鑒定研究。2.翻譯后修飾:很多mRNA表達(dá)產(chǎn)生的蛋白質(zhì)要經(jīng)歷翻譯后修飾如磷酸化,糖基化,酶原刺激等。翻譯后修飾是蛋白質(zhì)調(diào)節(jié)功能的重要方式,因此對蛋白質(zhì)翻譯后修飾的研究對闡明蛋白質(zhì)的功能具有重要作用?;?受體結(jié)合分析??梢岳没蚯贸头戳x技術(shù)分析基因表達(dá)產(chǎn)物-蛋白質(zhì)的功能。另外對蛋白質(zhì)表達(dá)出來后在細(xì)胞內(nèi)的定位研究也在一定程度上有助于蛋白質(zhì)功能的了解。
蛋白組究竟研究的是什么呢?第1,蛋白質(zhì)定性,或者說大規(guī)模檢測某些蛋白質(zhì)是否存在于樣品當(dāng)中;第2,蛋白質(zhì)定量,也就是大規(guī)模檢測某些蛋白質(zhì)的含量(包括一定含量與相對含量);第3,蛋白質(zhì)翻譯后修飾,這些修飾主要包括磷酸化,泛素化,糖基化,乙?;鹊?,也包括對這些翻譯后修飾的定量研究。這三大塊中所提到的大規(guī)模,既可以是樣品數(shù)量的大規(guī)模高通量,也可以是少量樣本中蛋白數(shù)量的大規(guī)模高通量。研究原因:首先,由于翻譯調(diào)控和翻譯后調(diào)控的存在,RNA的表達(dá)量與實(shí)際對應(yīng)蛋白質(zhì)的含量相關(guān)性并不高,就簡單地測試了酵母中mRNA和對應(yīng)蛋白質(zhì)的定量相關(guān)性,結(jié)果是,低豐度蛋白與mRNA的相關(guān)性尤其低,而高豐度蛋白和其mRNA的相關(guān)性則高,經(jīng)過平均后r值只為0.4。蛋白質(zhì)組研究技術(shù)在研究對象上,覆蓋了原核微生物、真核微生物、植物和動(dòng)物等范圍。
DIA 定量蛋白質(zhì)組學(xué)技術(shù)優(yōu)點(diǎn):采集所有離子及碎片圖譜,重現(xiàn)性好?;谒槠x子定量,選擇性好,可媲美 SPM/MRM。循環(huán)時(shí)間固定,掃描點(diǎn)數(shù)均勻,定量準(zhǔn)確度高。高通量,能同時(shí)監(jiān)測所有目標(biāo)蛋白。PRM 靶向定量蛋白組:平行反應(yīng)監(jiān)測(PRM)是一種靶向檢測方法,能夠?qū)δ繕?biāo)蛋白、目標(biāo)肽段進(jìn)行選擇性檢測,從而實(shí)現(xiàn)對目標(biāo)蛋白/肽段進(jìn)行相對定量。技術(shù)優(yōu)點(diǎn):不依賴抗體;特異性;結(jié)果準(zhǔn)確、可靠;高通量。修飾蛋白質(zhì)組學(xué):利用 LC-MS/MS 結(jié)合數(shù)據(jù)庫檢索的方法,在搜庫時(shí)設(shè)置修飾搜庫參數(shù),實(shí)現(xiàn)對目標(biāo)所有已知的修飾位點(diǎn)磷酸化、乙酰化、糖基化和泛素化進(jìn)行鑒定。我們通過研究蛋白質(zhì)組,可以為患者提供有用的疾病診斷、預(yù)后評估信息。哈爾濱外泌體蛋白質(zhì)組學(xué)研究內(nèi)容
蛋白質(zhì)組具有很高的細(xì)胞和組織特異性,不同的細(xì)胞組織表達(dá)不同的蛋白質(zhì)組。哈爾濱外泌體蛋白質(zhì)組學(xué)研究內(nèi)容
蛋白質(zhì)組學(xué)在醫(yī)療和健康方面有什么應(yīng)用?具體而言,蛋白質(zhì)組學(xué)在此類應(yīng)用中,更多地用于提供高通量蛋白質(zhì)定性定量信息。作為檢測手段的蛋白質(zhì)組學(xué):事實(shí)上,在當(dāng)前的生物醫(yī)學(xué)研究和臨床診斷中,蛋白質(zhì)組學(xué)相關(guān)技術(shù)有非常多的應(yīng)用。因?yàn)榈鞍踪|(zhì)組學(xué)技術(shù)的本質(zhì)(從分析化學(xué)角度來看),就是對蛋白質(zhì)的定性定量分析。生物醫(yī)學(xué)和臨床診斷中,需要大量表征一種或多種蛋白質(zhì)的含量、氨基酸序列、翻譯后修飾等信息。蛋白質(zhì)組學(xué)相關(guān)技術(shù)目前在一小部分]應(yīng)用中具有獨(dú)特優(yōu)勢。有很多蛋白質(zhì)組學(xué)的研究者在工業(yè)界和醫(yī)院進(jìn)行相關(guān)研究和日常工作。很容易發(fā)現(xiàn),當(dāng)前蛋白質(zhì)組學(xué)的臨床應(yīng)用更多地集中在第二類。第1類的應(yīng)用更接近于生物醫(yī)學(xué)基礎(chǔ)研究,目前還沒有和大部分人的現(xiàn)實(shí)生活產(chǎn)生關(guān)系。哈爾濱外泌體蛋白質(zhì)組學(xué)研究內(nèi)容