蛋白質(zhì)組學(xué)主要以全蛋白組(組織、細(xì)胞)、線粒體蛋白組、葉綠體蛋白組和外泌體蛋白組為研究對(duì)象,通過(guò)對(duì)蛋白組進(jìn)行定性、定量、分子功能分析、通路互作分析和蛋白互作分析,揭示生物學(xué)功能、作用機(jī)制、疾病診斷的標(biāo)志物以及預(yù)測(cè)蛋白的上、下游變化關(guān)系。蛋白質(zhì)組學(xué)可以克服核酸水平預(yù)測(cè)的不確定性、反映核酸翻譯后修飾情況。常用技術(shù):非靶向蛋白組學(xué):蛋白質(zhì)定性(膠條鑒定和溶液鑒定),高通量定量蛋白組(Labelfree、iTRAQ/TMT和DIA定量),多肽組學(xué)。蛋白質(zhì)組學(xué)技術(shù)有生物質(zhì)譜。浙江定量N糖基化蛋白質(zhì)組學(xué)研究?jī)?nèi)容
蛋白質(zhì)組學(xué)發(fā)展趨勢(shì):技術(shù)發(fā)展方面:蛋白質(zhì)組學(xué)的研究方法將出現(xiàn)多種技術(shù)并存,各有優(yōu)勢(shì)和的特點(diǎn),而難以象基因組研究一樣形成比較一致的方法。除了發(fā)展新方法外,更強(qiáng)調(diào)各種方法間的整合和互補(bǔ),以適應(yīng)不同蛋白質(zhì)的不同特征。另外,蛋白質(zhì)組學(xué)與其它學(xué)科的交叉也將日益明顯和重要,這種交叉是新技術(shù)新方法的活水之源,特別是,蛋白質(zhì)組學(xué)與其它大規(guī)??茖W(xué)如基因組學(xué),生物信息學(xué)等領(lǐng)域的交叉,構(gòu)成組學(xué)(omics)生物技術(shù)研究方法,所呈現(xiàn)出的系統(tǒng)生物學(xué)(SystemBiology)研究模式,將成為未來(lái)生命科學(xué)比較令人激動(dòng)的新前沿。廣東Label free多肽組學(xué)研究蛋白質(zhì)組的概念與基因組的概念有許多差別。
PRM靶向蛋白質(zhì)組學(xué):是一種基于Orbitrap為表示的高分辨、高精度質(zhì)譜的離子監(jiān)視技術(shù),首先利用四級(jí)桿質(zhì)量分析器的選擇能力,用Q1選擇目標(biāo)肽段的母離子,隨后在collisioncell中對(duì)母離子進(jìn)行碎裂,然后利用Orbitrap分析器在二級(jí)質(zhì)譜中檢測(cè)所選擇的母離子窗口內(nèi)的所有碎片信息。這樣能夠?qū)δ繕?biāo)蛋白質(zhì)、目標(biāo)肽段(如發(fā)生翻譯后修飾的肽段)進(jìn)行選擇性檢測(cè),即可對(duì)目標(biāo)蛋白質(zhì)/肽段進(jìn)行相對(duì)(一定)定量。從而實(shí)現(xiàn)對(duì)復(fù)雜樣本中的目標(biāo)蛋白質(zhì)/肽段進(jìn)行準(zhǔn)確地特異性分析。
常規(guī)蛋白質(zhì)組學(xué):Labelfree多肽組學(xué):顧名思義,就是不使用任何標(biāo)記方法,直接對(duì)肽段進(jìn)行質(zhì)譜鑒定和定性定量分析。實(shí)驗(yàn)流程簡(jiǎn)單,只需要對(duì)蛋白進(jìn)行常規(guī)酶解和除鹽步驟即可上機(jī)。定量方式分為兩種:峰面積(Peakintensity)和峰計(jì)數(shù)(Spectralcount),常用的是峰面積。不過(guò),由于質(zhì)譜采集時(shí)只選取topN的母離子進(jìn)行二級(jí)碎裂和MS2檢測(cè),所以會(huì)丟失一些豐度較低的肽段信息,缺失值比較多。TMT/iTRAQ標(biāo)記定量蛋白組學(xué):TMT全稱是TandemMassTag,是經(jīng)典化學(xué)標(biāo)記試劑,普遍用于差異表達(dá)蛋白質(zhì)組分析研究中。該技術(shù)采用6重、10重或16重同位素標(biāo)簽,與肽段的氨基發(fā)生共價(jià)結(jié)合反應(yīng),可實(shí)現(xiàn)同時(shí)對(duì)6個(gè)/10個(gè)/16個(gè)不同樣品中蛋白質(zhì)的定性和定量分析。(目前16標(biāo)鹿明生物可提供技術(shù)服務(wù))。蛋白質(zhì)組學(xué)是以蛋白質(zhì)組為研究對(duì)象,研究細(xì)胞、組織或生物體蛋白質(zhì)組成及其變化規(guī)律的科學(xué)。
蛋白質(zhì)組的研究不但能為生命活動(dòng)規(guī)律提供物質(zhì)基礎(chǔ),也能為眾多種疾病機(jī)理的闡明及攻克提供理論根據(jù)和解決途徑。通過(guò)對(duì)正常個(gè)體及病理個(gè)體間的蛋白質(zhì)組比較分析,我們可以找到某些“疾病特異性的蛋白質(zhì)分子”,它們可成為新藥物設(shè)計(jì)的分子靶點(diǎn),或者也會(huì)為疾病的早期診斷提供分子標(biāo)志。確實(shí),那些世界范圍內(nèi)銷路比較好的藥物本身是蛋白質(zhì)或其作用靶點(diǎn)為某種蛋白質(zhì)分子。因此,蛋白質(zhì)組學(xué)研究不只是探索生命奧秘的必須工作,也能為人類健康事業(yè)帶來(lái)巨大的利益。蛋白質(zhì)組學(xué)的研究是生命科學(xué)進(jìn)入后基因時(shí)代的特征。生物質(zhì)譜技術(shù)是蛋白質(zhì)組學(xué)研究中比較重要的鑒定技術(shù)。浙江定量N糖基化蛋白質(zhì)組學(xué)研究?jī)?nèi)容
蛋白質(zhì)組學(xué)包括翻譯后的修飾。浙江定量N糖基化蛋白質(zhì)組學(xué)研究?jī)?nèi)容
蛋白組學(xué)研究怎么做?PRM:平行反應(yīng)監(jiān)測(cè)(ParallelReactionMonitoring)是一種基于高分辨、高精度質(zhì)譜的離子監(jiān)視技術(shù),能夠?qū)δ繕?biāo)蛋白質(zhì)、目標(biāo)肽段(如發(fā)生翻譯后修飾的肽段)進(jìn)行選擇性檢測(cè),從而實(shí)現(xiàn)對(duì)目標(biāo)蛋白質(zhì)/肽段進(jìn)行一定定量,因此也被稱之為基于液相色譜質(zhì)譜聯(lián)用技術(shù)的WesternBlot(LC-MSMSbasedWesternBlot,L-WB)。PRM技術(shù)基于Q-Orbitrap為表示的高分辨、高精度質(zhì)譜平臺(tái),首先利用四級(jí)桿質(zhì)量分析器的選擇能力,用Q1選擇目標(biāo)肽段的母離子,隨后在Collisioncell中對(duì)母離子進(jìn)行碎裂,之后利用Orbitrap分析器在二級(jí)質(zhì)譜中檢測(cè)所選擇的母離子窗口內(nèi)的所有碎片信息。這樣即可對(duì)復(fù)雜樣本中的目標(biāo)蛋白質(zhì)/肽段進(jìn)行準(zhǔn)確地特異性分析。浙江定量N糖基化蛋白質(zhì)組學(xué)研究?jī)?nèi)容
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