二代測(cè)序—全外顯子測(cè)序的原理是什么？

全外顯子測(cè)序主要是利用序列捕獲技術(shù)，將基因組 DNA 中的外顯子區(qū)域富集起來(lái)，然后通過(guò)高通量測(cè)序技術(shù)（如第二代測(cè)序技術(shù) Illumina 測(cè)序平臺(tái)）對(duì)富集后的外顯子 DN**段進(jìn)行測(cè)序。其大致步驟包括 DNA 提取、片段化、文庫(kù)構(gòu)建、外顯子捕獲、測(cè)序和數(shù)據(jù)分析等。例如，在文庫(kù)構(gòu)建過(guò)程中，將提取的基因組 DN**段化后，在片段兩端連接上特定的接頭序列，這些接頭序列可以用于后續(xù)的擴(kuò)增和測(cè)序反應(yīng)。然后通過(guò)與外顯子區(qū)域互補(bǔ)的寡核苷酸探針，將外顯子片段從全基因組 DNA 文庫(kù)中 “捕獲” 出來(lái)，經(jīng)過(guò)清洗去除未結(jié)合的 DN**段后，對(duì)捕獲的外顯子文庫(kù)進(jìn)行大規(guī)模的平行測(cè)序。 二代測(cè)序是基于PCR和基因芯片發(fā)展而來(lái)的DNA測(cè)序技術(shù)。北京哪里有二代測(cè)序提供

二代測(cè)序——微生物基因組應(yīng)用領(lǐng)域

醫(yī)學(xué)領(lǐng)域

傳染病診斷與溯源：對(duì)于引起傳染病的微生物，二代測(cè)序可以快速鑒定病原體的種類(lèi)和基因型。例如，在****期間，二代測(cè)序技術(shù)在快速確定的基因組序列、追蹤病毒的傳播路徑等方面發(fā)揮了關(guān)鍵作用。通過(guò)對(duì)病毒基因組的SNP分析，可以區(qū)分不同的病毒株，有助于**防控措施的制定。

微生物與疾病關(guān)聯(lián)研究：研究人體微生物組（如腸道微生物組、口腔微生物組等）與疾病的關(guān)系。例如，腸道微生物的基因組測(cè)序發(fā)現(xiàn)，某些腸道微生物的基因變化與炎癥性腸?。↖BD）有關(guān)。通過(guò)比較IBD患者和健康人的腸道微生物基因組，發(fā)現(xiàn)了一些可能與疾病發(fā)***展相關(guān)的功能基因，如參與免疫調(diào)節(jié)和代謝的基因。 湖南二代測(cè)序提供二代測(cè)序是一種能夠同時(shí)對(duì)數(shù)百萬(wàn)甚至數(shù)十個(gè)億DNA片段進(jìn)行測(cè)序的方法。

二代測(cè)序技術(shù)在不同人群中的準(zhǔn)確性有何差異②

遺傳病患者及攜帶者

優(yōu)勢(shì)：在常見(jiàn)單基因遺傳病如囊性纖維化、鐮狀細(xì)胞貧血等的檢測(cè)中，二代測(cè)序技術(shù)準(zhǔn)確性高，能夠快速、準(zhǔn)確地找到致病基因，對(duì)于有家族遺傳病史的人群，可有效確定是否攜帶致病基因，評(píng)估生育患病后代的風(fēng)險(xiǎn)。

局限性：對(duì)于罕見(jiàn)遺傳病，由于基因突變的多樣性和復(fù)雜性，可能存在部分致病基因未被覆蓋或難以準(zhǔn)確解讀的情況，導(dǎo)致準(zhǔn)確性有所降低。此外，即使檢測(cè)結(jié)果為陰性，也不能完全排除患病可能，因部分遺傳病可能由未知基因突變或基因與環(huán)境相互作用引起2

二代測(cè)序應(yīng)用于蛋白組測(cè)序的常見(jiàn)方式①？

基于轉(zhuǎn)錄組測(cè)序間接推斷蛋白信息

原理：由于蛋白質(zhì)是由mRNA翻譯而來(lái)，先利用二代測(cè)序技術(shù)對(duì)轉(zhuǎn)錄組（主要是mRNA）進(jìn)行高通量測(cè)序，獲得基因轉(zhuǎn)錄水平的信息?；谥行姆▌t中mRNA和蛋白質(zhì)的對(duì)應(yīng)關(guān)系，在一定程度上可以推測(cè)出相應(yīng)蛋白質(zhì)可能的表達(dá)情況。例如，通過(guò)分析mRNA的表達(dá)量高低，預(yù)估對(duì)應(yīng)蛋白質(zhì)的豐度趨勢(shì)。如果某個(gè)基因的mRNA在樣本中表達(dá)量很高，那么大概率其翻譯產(chǎn)生的蛋白質(zhì)在細(xì)胞內(nèi)的含量也相對(duì)較高，但這只是初步推斷，因?yàn)檫€存在翻譯后調(diào)控等影響因素。

應(yīng)用案例：在研究某種植物在不同生長(zhǎng)階段的蛋白表達(dá)變化時(shí)，先進(jìn)行轉(zhuǎn)錄組測(cè)序，發(fā)現(xiàn)與光合作用相關(guān)的一些關(guān)鍵基因的mRNA在植物生長(zhǎng)旺盛期表達(dá)量***上調(diào)，后續(xù)再通過(guò)其他蛋白檢測(cè)手段驗(yàn)證到對(duì)應(yīng)的光合作用相關(guān)蛋白質(zhì)含量確實(shí)增多，這就體現(xiàn)了通過(guò)轉(zhuǎn)錄組測(cè)序間接了解蛋白表達(dá)趨勢(shì)的可行性。 單細(xì)胞測(cè)序?qū)儆诙鷾y(cè)序嗎？

二代測(cè)序在代謝組研究中的應(yīng)用途徑①

通過(guò)轉(zhuǎn)錄組測(cè)序關(guān)聯(lián)代謝組

原理：轉(zhuǎn)錄組測(cè)序借助二代測(cè)序技術(shù)可以獲取細(xì)胞或組織中所有mRNA的表達(dá)信息。由于基因表達(dá)**終會(huì)影響代謝過(guò)程，mRNA轉(zhuǎn)錄水平的變化往往會(huì)導(dǎo)致后續(xù)代謝途徑中關(guān)鍵酶的表達(dá)改變，進(jìn)而影響代謝物的合成與轉(zhuǎn)化。例如，當(dāng)某個(gè)參與糖代謝途徑的關(guān)鍵酶基因轉(zhuǎn)錄上調(diào)時(shí)，對(duì)應(yīng)的酶含量可能增加，從而加速該代謝途徑的運(yùn)轉(zhuǎn)，使代謝產(chǎn)物的量也隨之發(fā)生變化。

案例：在植物抗逆研究中，對(duì)遭受干旱脅迫的植物和正常生長(zhǎng)的植物分別進(jìn)行轉(zhuǎn)錄組測(cè)序。發(fā)現(xiàn)許多與滲透調(diào)節(jié)物質(zhì)（如脯氨酸、甜菜堿等）合成相關(guān)的基因轉(zhuǎn)錄水平在干旱脅迫植株中顯著提高。再結(jié)合對(duì)植物代謝組的分析，的確檢測(cè)到脯氨酸、甜菜堿等代謝物的含量明顯增多，表明植物通過(guò)調(diào)節(jié)基因轉(zhuǎn)錄來(lái)改變代謝，以適應(yīng)干旱環(huán)境。

二代和三代測(cè)序的區(qū)別？浙江二代測(cè)序運(yùn)用

二代測(cè)序包括全基因組測(cè)序和全外顯子測(cè)序。北京哪里有二代測(cè)序提供

二代測(cè)序不同應(yīng)用場(chǎng)景下的速度有多快？

病原微生物檢測(cè)：一般來(lái)說(shuō)，二代測(cè)序用于檢測(cè)病原微生物時(shí)，能夠在幾個(gè)小時(shí)到一天左右出結(jié)果。比如在快速檢測(cè)血液中的病原微生物時(shí)，通?？梢栽趲讉€(gè)小時(shí)內(nèi)獲得檢測(cè)結(jié)果，相比傳統(tǒng)的血液培養(yǎng)方法，時(shí)間大幅縮短，傳統(tǒng)血液培養(yǎng)一般需要幾天到一周的時(shí)間 。

全基因組測(cè)序：如果是對(duì)人類(lèi)全基因組進(jìn)行測(cè)序，以目前的技術(shù)水平，使用二代測(cè)序技術(shù)完成一個(gè)人的全基因組測(cè)序，一般需要 1-2 天左右的時(shí)間。而在十幾年前，人類(lèi)全基因組測(cè)序計(jì)劃***完成時(shí)，耗費(fèi)了大量的時(shí)間和精力，相比之下二代測(cè)序技術(shù)的速度提升***。

轉(zhuǎn)錄組測(cè)序：轉(zhuǎn)錄組測(cè)序的時(shí)間相對(duì)較短，一般幾個(gè)小時(shí)內(nèi)可以完成對(duì)大量 RNA 分子的測(cè)序和初步數(shù)據(jù)分析，進(jìn)而快速了解基因在特定條件下的表達(dá)情況8. 北京哪里有二代測(cè)序提供