是否有效的祛除了內(nèi)源性酶和生物素 應注意的是,并不是每一種組織均需要祛除內(nèi)源性酶和生物素,但對于內(nèi)源性酶和生物素含量豐富的組織如肝臟、腎臟等,如染色效果不佳,均考慮此原因。處理方法為:(1)滅活堿性磷酸酶:常用的方法是將左旋咪唑(24mg/ml)加入底物液中,并保持pH值在7.6~8.2之間,即能祛除大部分內(nèi)源性堿性磷酸酶,對于仍能干擾染色的酸性磷酸酶,可用50mmol/L的酒石酸;(2)飽和處理內(nèi)源性生物素:消除內(nèi)源性生物素的方法是事先滴加親和素以飽和內(nèi)源性生物素,使之不再有剩余的結(jié)合位點,具體操病理實驗免疫組化專業(yè)設備,真實實驗結(jié)果。北京免疫組化服務
織材料的處理
組織材料的處理是獲得良好免疫組織化學結(jié)果的前提,必需保證要檢測的細胞或組織取材新鮮,固定及時,形態(tài)保存完好,抗原物質(zhì)的抗原性不丟失、不擴散和被破壞(下節(jié) 詳述)。
三、免疫染色
可在細胞涂片或組織切片上進行免疫染色。一般程序是:①標記抗體與標本中抗原反應結(jié)合;②用PBS洗去未結(jié)合的成分;③直接觀察結(jié)果(免疫熒光直接法);或顯色后再用顯微鏡觀察(免疫酶直接法)。在此基礎上發(fā)展出間接法,多層法,雙標記法等各種方法,將在本書各有關章 節(jié) 內(nèi)詳述。
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常用染色方法
根據(jù)標記物的不同分為免疫熒光法,免疫酶標法,親和組織化學法,后者是以一種物質(zhì)對某種組織成分具有高度親合力為基礎的檢測方法。這種方法敏感性更高,有利于微量抗原(抗體)在細胞或亞細胞水平的定位,其中生物素—抗生物素染色法較好常用。判定分析編輯
免疫組化染色(IHC)
免疫組化染色(IHC)
從實驗結(jié)果而言,免疫組化技術服務主要涉及抗體實驗結(jié)果的描述與分析,圖片的確定與選取,相關數(shù)據(jù)的提供,上述工作是免疫組化工作的重點內(nèi)容,只有嚴格的實驗設計,標準的實驗操作,專業(yè)化的結(jié)果分析才能更好的滿足客戶的要求,這點對于形式為腹水,上清,培養(yǎng)液之類的抗體顯得更為重要。關于上述服務內(nèi)容應該在實驗開始前由雙方明確,一般而言,客戶方實驗前應提出需要什么樣的結(jié)果與分析,例如是簡要還是詳細的描述實驗結(jié)果,需要實驗數(shù)據(jù)否,圖片的數(shù)量與規(guī)格等。如果為雙盲試驗或有第三方參與,則事先申明。
如肽類、神經(jīng)遞質(zhì)、細胞因子、受體、表面抗原等等均可用免疫組織化學方法顯示,因而目前在基礎與臨床科研中被廣泛應用。較近幾年,分子生物學研究異?;钴S,但較終還要歸到形態(tài)上來。用免疫組織化學方法對所研究的大分子分子進行定位,進而深入研究其功能。免疫組化技術免疫組織化學編輯染色方法1.直接法熒光素直接標記特異性抗體(—抗)上,標記抗體與抗原結(jié)合(在切片上)熒光顯微鏡下觀察→檢測抗原?!髅笜丝贵w要顯示后鏡檢。直接法優(yōu)點:簡單,時間短,特異性強。缺點:靈敏度低,所需抗體量大(不經(jīng)濟)。應用:基本不用!2.間接法熒光素標記在二抗上(二抗:抗產(chǎn)生一抗動物的IgG抗體)?!@色后鏡檢特點:較直接法靈敏,可標記一種抗體→鑒定多種抗原。3.非標記Ab橋法:“橋法”是酶標記抗體的改進,經(jīng)過三次抗體,其二抗為未標記橋抗體。(1)單橋法(2)雙橋法在三抗之后,將二抗和三抗再重復一次,可增大染色強度?!锾貏e提示:注意動物種屬關系4.***法(過氧化物酶—抗過氧化物酶法Peroxidaseanti—peroxidasemethod,***法)~是橋法的改良,既先形成***復合物→抗原—抗體—抗IgG抗體—***復合物。該法簡化了操作步驟,提高了靈敏度。免疫組化找上海融享生物科技有限公司。
——90年代分子雜交技術、原位雜交技術、免疫細胞化學分類方法迅速發(fā)展。——2000年各種免疫組化技術更加成熟,使免疫組化技術成為當今生物醫(yī)學中形態(tài)、功能代謝綜合研究的一項有力工具。其應用范圍深達醫(yī)學各個學科,是目前生命科學工作者應該掌握的基本技術之一。免疫組化技術技術分類(1)根據(jù)染色方式分成:①貼片染色②漂浮染色(2)根據(jù)Ag—Ab結(jié)合方式分成:①直接法②間接法③多層法(3)按標記物的性質(zhì)分成:①免疫熒光技術(免疫熒光法)②免疫酶技術(酶標抗體法、橋法、PAD法、ABC法)③免疫金屬技術(免疫鐵蛋白法、免疫金染色法、蛋白A金法)免疫組化技術標記物(1)必要性:組織細胞內(nèi)Ag—Ab結(jié)合反應一般是不可見的,若在鏡下檢測,則必須具有可視性標記物。(2)常用標記物①熒光素:較常用的是異硫一氰酸熒光素(Fluoresceinisothiocyanate,F(xiàn)ITC)——熒光顯微鏡下呈綠色熒光四乙基羅達明(rho—damineRB200)——熒光顯微鏡下發(fā)橙紅色熒光②酶:辣根過氧化物酶、堿性磷酸酶。③生物素:(Biotin)④鐵蛋白金等:主要應用于免疫電鏡。其他:如同位素(因涉及污染和防護難一般不用)免疫組化技術應用凡是組織細胞內(nèi)具有抗原性的物質(zhì)。融享生物在線為您提供眾多企業(yè)轉(zhuǎn)錄組測序/mRNA測序技術服務。北京免疫學免疫組化技術
免疫組化切片 不掉片,厚薄均勻哪里好找上海融享生物。北京免疫組化服務
石蠟切片由于在制作過程中使用大量有機溶劑(酒精、二甲苯)和(或)包埋過程中加熱處理使抗原活性喪失,所以通常采用抗原修復方法來提高石蠟切片免疫組化反應的敏感性。而對于冰凍切片的制作由于不經(jīng)過上述過程,在以往的研究中通常不再經(jīng)過抗原修復而直接做免疫組化。但用冰凍切片做免疫組化研究時通常采用多聚甲醛固定,眾所周知多聚甲醛對抗原有封閉作用,并且在神經(jīng)系統(tǒng)中由于抗原表達量較微量,造成免疫組化染色中需要配制較高濃度的抗體工作液,造成抗體消耗較大,染色效果不佳。因此本文采用抗原修復和不修復兩組切片進行免疫組化染色,比較免疫反應敏感程度,以期進一步提高免疫組化反應的敏感性。北京免疫組化服務