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單克隆抗體:解決多克隆抗體特異性不高的理想方法是制備識(shí)別單一表位特異性的抗體。如果能獲得只針對(duì)單一表位的漿細(xì)胞克隆,并使其在體外擴(kuò)增分泌抗體,就有可能獲得單一表位特異性的抗體。然而,漿細(xì)胞在體外的壽命較短,難以培養(yǎng)。為克服這一缺點(diǎn),Kohler和Milstein將可產(chǎn)生特異性抗體但短壽的B細(xì)胞與不產(chǎn)生抗體但長壽的骨髓瘤細(xì)胞融合,獲得了可以產(chǎn)生單克隆抗體的雜交瘤細(xì)胞,從而建立了單克隆抗體制備技術(shù)。通過該技術(shù)融合形成的雜交瘤(hybridoma),既具有骨髓瘤細(xì)胞大量擴(kuò)增和永生的特性,又具有免疫B細(xì)胞合成和分泌特異性抗體的能力。單克隆抗體的研究有助于解決藥物抗性的問題。杭州Prestige抗體費(fèi)用
抗體的功能與其結(jié)構(gòu)密切相關(guān)。同一抗體的V區(qū)和C區(qū)的氨基酸組成和順序的不同,決定了其功能上的差異。不同抗體的V區(qū)和C區(qū)在結(jié)構(gòu)變化上具有一定的規(guī)律,又使得其在功能上存在共性。V區(qū)和C區(qū)的組成和結(jié)構(gòu),決定了抗體的生物學(xué)功能。識(shí)別并特異性結(jié)合抗原是抗體的主要功能,執(zhí)行該功能的結(jié)構(gòu)是抗體的V區(qū),其中CDR部位在識(shí)別和結(jié)合特異性抗原中起決定性作用??贵w有單體、二聚體和五聚體,因此結(jié)合抗原表位的數(shù)目也不相同。抗體結(jié)合抗原表位的個(gè)數(shù)稱為抗原結(jié)合價(jià)。杭州Prestige抗體費(fèi)用單克隆抗體可以用于研究疾病的發(fā)病機(jī)制。
單克隆抗體技術(shù)在臨床應(yīng)用中為疾病的診斷、調(diào)理提供了新手段,作為調(diào)理用藥物,單克隆抗體主要應(yīng)用于tumour、自身免疫疾病、部位移植排斥及病毒傳染等領(lǐng)域。單克隆抗體也可用于tumour的導(dǎo)向調(diào)理,將針對(duì)某一tumour抗原的單克隆抗體與化療或放療藥物連接,利用單克隆抗體的專一性識(shí)別結(jié)合特點(diǎn),將藥物攜帶至靶細(xì)胞并直接將其殺傷。由于單克隆抗體具有特異性強(qiáng)、純度高、均一性好等優(yōu)點(diǎn),極大促進(jìn)了單克隆抗體檢測(cè)試劑盒的發(fā)展,在病原微生物、免疫細(xì)胞及細(xì)胞因子的檢測(cè)診斷中廣泛應(yīng)用。若將放射性標(biāo)記物與單克隆抗體連接,注入患者體內(nèi)后可進(jìn)行放射免疫顯像,協(xié)助tumour的診斷。在親和色譜中單克隆抗體是重要的配體,若將單克隆抗體固定到一個(gè)惰性的固相基質(zhì)上,則可用于特異性抗原分子的高度純化。
單克隆抗體的大量制備主要采用動(dòng)物體內(nèi)誘生法和體外培養(yǎng)法。(1)體內(nèi)誘生法取BALB/c小鼠,首先腹腔注射0.5ml液體石蠟或降植烷進(jìn)行預(yù)處理。1-2周后,腹腔內(nèi)接種雜交瘤細(xì)胞。雜交瘤細(xì)胞在小鼠腹腔內(nèi)增殖,并產(chǎn)生和分泌單克隆抗體。約1-2周,可見小鼠腹部膨大。用注射器抽取腹水,即可獲得大量單克隆抗體。(2)體外培養(yǎng)法將雜交瘤細(xì)胞置于培養(yǎng)瓶中進(jìn)行培養(yǎng)。在培養(yǎng)過程中,雜交瘤細(xì)胞產(chǎn)生并分泌單克隆抗體,收集培養(yǎng)上清液,離心去除細(xì)胞及其碎片,即可獲得所需要的單克隆抗體。但這種方法產(chǎn)生的抗體量有限。各種新型培養(yǎng)技術(shù)和裝置不斷出現(xiàn),極大提高了抗體的生產(chǎn)量。多克隆抗體的制備過程可以在實(shí)驗(yàn)室中完成,并且通常具有較高成功率。
19世紀(jì)后期,Von Behring及其同事Kitasato研究發(fā)現(xiàn),用白喉或破傷風(fēng)免疫動(dòng)物后可產(chǎn)生具有中和有害素作用的物質(zhì),稱之為antitoxin,隨后引入“抗體”一詞來泛指抗有害素類物質(zhì)??贵w(antibody,Ab)是B細(xì)胞接受抗原刺激后增殖分化為漿細(xì)胞所產(chǎn)生的糖蛋白,主要存在于血清等體液中,是介導(dǎo)體液免疫的重要效應(yīng)分子,能與相應(yīng)抗原特異性結(jié)合,發(fā)揮免疫功能。1937年,Tiselius和Kabat用電泳方法將血清蛋白分為白蛋白、α1、α2、β及γ球蛋白等組分,并發(fā)現(xiàn)抗體主要存在于γ區(qū),因此抗體又被稱為γ球蛋白。單克隆抗體可用于針對(duì)惡性癥細(xì)胞的免疫調(diào)理。杭州Prestige抗體費(fèi)用
多克隆抗體可以通過親和層析或凝集素親和純化方法進(jìn)行純化,以獲得較高純度的抗體。杭州Prestige抗體費(fèi)用
抗體結(jié)構(gòu)域:輕鏈有VL和CL兩個(gè)結(jié)構(gòu)域;IgG、IgA和IgD的重鏈有VH、CH1、CH2和CH3四個(gè)結(jié)構(gòu)域;IgM和IgE的重鏈有五個(gè)結(jié)構(gòu)域,即多一個(gè)CH4結(jié)構(gòu)域。每個(gè)結(jié)構(gòu)域由約110個(gè)氨基酸組成,氨基酸序列具有相似性,其二級(jí)結(jié)構(gòu)是由幾條多肽鏈折疊形成的兩個(gè)反向平行的β片層(anti-parallel β sheet)構(gòu)成的,兩個(gè)β片層中心的兩個(gè)半胱氨酸殘基由一個(gè)鏈內(nèi)二硫鍵垂直連接,形成一個(gè)“β桶狀(βbarrel)”或“β-三明治 (β sandwich)”結(jié)構(gòu),這種折式稱為免疫球蛋白折疊(immunoglobulin folding)。許多膜型和分泌型的蛋白質(zhì)分子也含有這類獨(dú)特折疊的二級(jí)結(jié)構(gòu),因此,這類分子被統(tǒng)稱為免疫球蛋白超家族(immunoglobulinsuperfamily,IgSF)。杭州Prestige抗體費(fèi)用