Nature：從血液通過(guò)exosomes入手早期確診**。原文標(biāo)題：Glypican-1identifiescancerexosomesanddetectsearlypancreaticcancer。原文摘要：Exosomes are lipid-bilayer-enclosed extracellular vesicles that contain proteins and nucleic acids. They are secreted by all cells and circulate in the blood. Specific detection and isolation of cancer-cell-derived exosomes in the circulation is currently lacking. Using mass spectrometry analyses, we identify a cell surface proteoglycan, glypican-1 (GPC1), specifically enriched on cancer-cell-derived exosomes. GPC1+ circulating exosomes (crExos) were monitored and isolated using flow cytometry from the serum of patients and mice with cancer. GPC1+ crExos were detected in the serum of patients with pancreatic cancer with absolute specificity and sensitivity, distinguishing healthy subjects and patients with a benign pancreatic disease from patients with early- and late-stage pancreatic cancer. Levels of GPC1+ crExos correlate with tumour burden and the survival of pre- and post-surgical patients. 胸水的外泌體怎么制備？浙江分離外泌體要多少錢

    體液樣本收集外泌體。1、選擇血清還是血漿？推薦大多數(shù)研究選擇血漿。血液凝固過(guò)程中血小板會(huì)產(chǎn)生大量外泌體，含量占血清中外泌體的50%以上，選擇血漿可避免不必要的影響。2、注意抗凝劑的選擇肝素類抗凝劑與PCR假陰性有關(guān)，這可能是因?yàn)楦嗡嘏c引物和/或酶有競(jìng)爭(zhēng)作用。除了***PCR，肝素可以與外泌體結(jié)合，阻止細(xì)胞攝取外泌體。因此需要記錄肝素類藥物治療的患者的血液樣本。EDTA和雙嘧達(dá)莫（CTAD），CTAD可以阻止血小板的***并***其釋放外泌體。EDTA可能會(huì)干擾PCR反應(yīng)（盡管其程度小于肝素），但是還是優(yōu)于其他選擇。此外，有研究表明鈣螯合劑可在體外促進(jìn)外泌體與血小板的結(jié)合從而降低經(jīng)EDTA、或檸檬酸鹽處理后的血液樣本中外泌體的表觀數(shù)量。使用肝素時(shí)這種影響就不會(huì)發(fā)生，因此建議在測(cè)量外泌體的精確數(shù)量時(shí)選用肝素。但是也有研究表明肝素可以導(dǎo)致體外條件下外泌體的減少?？傊壳吧行枰嗟难芯空撟C抗凝劑是否及如何對(duì)外泌體的釋放，作用和下游反應(yīng)產(chǎn)生特異性影響。 天津鑒定外泌體多少錢外泌體數(shù)據(jù)庫(kù)有哪些？

⊙外泌體發(fā)揮功能并一定需要受體細(xì)胞攝入外泌體：外泌體的膜蛋白有可能與細(xì)胞膜蛋白作用，***細(xì)胞內(nèi)通路

⊙外泌體的角色之一：細(xì)胞-細(xì)胞通訊，比如抗原遞呈

⊙外泌體的角色之二：垃圾箱，外排多余或者無(wú)功能的細(xì)胞成分

為什么要研究外泌體？：

⊙揭示疾病發(fā)病機(jī)制：從微環(huán)境角度揭示細(xì)胞之間通訊促進(jìn)疾病發(fā)生的原因。

⊙尋找疾病診斷和預(yù)后的分子標(biāo)志物

⊙外泌體作為藥物載體，實(shí)現(xiàn)靶向給藥

外泌體的分離和鑒定方法：

⊙外泌體的分離：差速離心、密度梯度離心、體積排阻色譜法、過(guò)濾法、聚合物沉淀法、免疫分離、隔離篩選法

⊙外泌體分離后需要進(jìn)行粒徑分析：如NanoSight NS300

⊙外泌體檢測(cè)的marker：常用的有TSG101、CD9、CD63、CD81、ALIX、HSP70

industryTemplate血漿樣品外泌體怎么制備？

    眾所周知，成熟的miRNA可以與裝配蛋白（assemblyproteins）相互作用，形成一個(gè)復(fù)合物，稱miRISC。miRISC的主要成分包括miRNA、可被miRNA***的mRNA、GW182和AGO2。人類AGO2蛋白，主要結(jié)合miRNA5’末端的U或A堿基，能介導(dǎo)mRNA和miRNA結(jié)合，介導(dǎo)后續(xù)的翻譯***或mRNA分子降解。**近研究發(fā)現(xiàn)AGO2蛋白和外泌體miRNA分揀機(jī)制之間有一種可能的聯(lián)系。對(duì)外泌體蛋白進(jìn)行分析時(shí)，用質(zhì)譜MS或WBD都有發(fā)現(xiàn)AGO2蛋白的存在。Guduric-Fuchsetal.發(fā)現(xiàn)敲除了AGO2基因后，會(huì)減少那些偏好于進(jìn)入外泌體的miRNA的類型或豐度，如HEK293T細(xì)胞系來(lái)源的外泌體中的miR-451,miR-150和miR-142-3p。還有些證據(jù)也支持miRISC和外泌體miRNA分揀之間的聯(lián)系。首先，miRISC的主要成分被發(fā)現(xiàn)與MVB（多囊泡小體）有相同定位；其次，阻礙MVB被溶酶體降解會(huì)導(dǎo)致miRISC的過(guò)度累積，而阻斷MVB形成會(huì)導(dǎo)致miRISC的丟失；再次，細(xì)胞***時(shí)出現(xiàn)的miRNA***靶序列水平的變化可能引起外泌體miRNA的分揀?？傊承﹎iRNA中的特異序列可能指導(dǎo)它們整合入外泌體，而有些酶或其他蛋白質(zhì)可能也能控制外泌體miRNA的分揀--以一種不依賴于miRNA序列的形式。 做外泌體就找云生物！四川測(cè)序外泌體多少錢

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轉(zhuǎn)移的**細(xì)胞為適應(yīng)新環(huán)境，沉默了自己的基因，促進(jìn)**轉(zhuǎn)移灶形成，而沉默基因的正是外泌體中的microRNA。文章概要為：“Microenvironment-induced PTEN loss by exosomal microRNA primes brain metastasis outgrowth”，由外泌體分泌的microRNA引起微環(huán)境介導(dǎo)的PTEN丟失，為腦轉(zhuǎn)移生長(zhǎng)做了準(zhǔn)備。這篇是2015.10.19發(fā)表在Nature 上的文章，文章主要講的是，腦環(huán)境依賴的PTEN可回復(fù)性表達(dá)，受腦內(nèi)的星形膠質(zhì)細(xì)胞分泌的外泌體中的microRNA調(diào)控。浙江分離外泌體要多少錢