空間轉(zhuǎn)錄組測序的數(shù)據(jù)質(zhì)量和玻片有效區(qū)域的利用率、貼片的質(zhì)量和透化時間息息相關(guān)。貼片質(zhì)量不良會影響總的有效spot數(shù)等；而透化不合理會導致spot的reads數(shù)、基因中位數(shù)等參數(shù)。而在特異性基因表達方面，我們也可以統(tǒng)計空間轉(zhuǎn)錄組群體的特異性基因表達即Markergene，將他們在組織切片以及空轉(zhuǎn)上進行著色。我們也可以對于任意一個已知的基因或者數(shù)據(jù)庫中的一些細胞Marker，然后將其在基因表達在空間轉(zhuǎn)錄組的切片以及HE染色上展示自己的基因表達進而了解，群體中的可能的細胞組成關(guān)系。烈冰科技已建立了基于空間轉(zhuǎn)錄組的高通量測序?qū)嶒灦嗥脚_。寧波烈冰科技空間轉(zhuǎn)錄組平臺

基于橋式PCR技術(shù)的簇生成可以將模版鏈迅速擴增成千上萬倍，保證過程中足夠的測序深度。測序時使用特殊標記的dNTP：1）堿基上通過敏感鍵修飾上不同的熒光基團，用于區(qū)分ATCG；2）3端使用疊氮基團封閉，保證一次循環(huán)只上一個dNTP。每一輪循環(huán)結(jié)束時，會通過高速熒光顯微鏡記錄熒光圖像，再通入試劑除去熒光基團和疊氮基團，開啟下一循環(huán)。通過分析讀取同一位點的熒光，實時獲取模版鏈的堿基序列。由于過程中使用的化學反應并不可控，隨著循環(huán)數(shù)的增大會出現(xiàn)不同步的情況，因此Illumina的讀長只能限制在200bp左右。杭州高通量測序空間轉(zhuǎn)錄組數(shù)據(jù)分析可視化搭建多種測序數(shù)據(jù)的生物信息分析平臺，5000+項目檢驗，真實可信賴。

空間轉(zhuǎn)錄組技術(shù)流程：1、組織優(yōu)化由于不同物種、組織來源的樣本所需的比較好透化時間不盡相同，在正式開展空間轉(zhuǎn)錄組測序?qū)嶒炃?，需要利用組織優(yōu)化kit進行條件的摸索。組織優(yōu)化芯片上包含8個捕獲區(qū)域，每個區(qū)域均覆蓋了熒光標記探針，可捕獲mRNA形成帶有熒光標簽的cDNA，隨即可通過熒光成像結(jié)果判定比較好透化時間及組織優(yōu)化條件。2、空間轉(zhuǎn)錄組測序確定組織優(yōu)化條件后，即可進行切片、H&E染色及成像、空間轉(zhuǎn)錄組文庫構(gòu)建及測序分析流程。

當組織冷凍切片附在帶有spatialbarcode的空間轉(zhuǎn)錄組芯片上時，通過透化處理，細胞內(nèi)的mRNA釋放出來，從而被芯片上帶有oligo-dT的探針捕獲。被捕獲的mRNA開始逆轉(zhuǎn)錄，得到的cDNA中包含了spatialbarcode序列。通過上機測序，可以將每個mRNA轉(zhuǎn)錄的序列映射回組織切片中的映射回組織切片中的原始位置。Visium空間轉(zhuǎn)錄組的重點在于芯片部分：正式文庫構(gòu)建的芯片上有4個捕獲區(qū)域（6.5mmX6.5mm，可以檢測4個樣本）每個捕獲區(qū)域含有約5000個被條形碼標記的點（barcodedspots）每個spot直徑55μm，每個spot能捕獲1-10個細胞spot與spot中心點之間的距離為100μm每個spot含有上百萬個可以與mRNA結(jié)合的捕獲探針，每個探針上都帶有獨特的spatialbarcodes，用以標記捕獲的mRNA的空間位置。烈冰科技成立10余年，為科研學者提供專注的測序數(shù)據(jù)分析服務。

10xGenomics空間轉(zhuǎn)錄組用于文庫構(gòu)建的每張載玻片上有四個捕獲區(qū)域，每個捕獲區(qū)域的大小為6.5x6.5mm，包含5000個被條形碼標記的點（barcodedspots），每個點的直徑為55μm，點和點之間中心的距離為100μm，并且每個點都有一個barcode序列。組織切片的細胞中會釋放出mRNA，遷移到每個spot的mRNA會被標記上相應的barcode序列，然后進行文庫構(gòu)建并進行測序。根據(jù)數(shù)據(jù)的條形碼信息對數(shù)據(jù)進行分析，以確定哪些數(shù)據(jù)來自哪個位置，從而實現(xiàn)空間基因表達的可視化?？臻g轉(zhuǎn)錄組測序技術(shù)遍地開花，烈冰服務讓您的生物醫(yī)學研究如虎添翼。廣州烈冰科技空間轉(zhuǎn)錄組數(shù)據(jù)分析

烈冰測序數(shù)據(jù)分析平臺，不依賴已有物種信息，可研究非模式物種，針對不同平臺的數(shù)據(jù)，制定多套流程；寧波烈冰科技空間轉(zhuǎn)錄組平臺

空間轉(zhuǎn)錄組數(shù)據(jù)可以用單細胞轉(zhuǎn)錄組數(shù)據(jù)的分析策略進行分析，例如，利用GO和Pathway分析篩選不同發(fā)育時期特定空間區(qū)域內(nèi)的信號通路及其關(guān)鍵基因的較大情況，揭示在特定發(fā)育時期特定區(qū)域內(nèi)發(fā)生的生物學過程。針對任何一個基因，空間轉(zhuǎn)錄組可以顯示表達該基因的點陣及其空間排布；單細胞轉(zhuǎn)錄組可以給出該基因表達的細胞類群；原位測序可以給出該基因在細胞內(nèi)的表達狀況。通過不同發(fā)育時間點的信息比較，可以分析細胞類群在某個部位在不同時間點的差異，給出其在細胞內(nèi)的真實的演變狀況。寧波烈冰科技空間轉(zhuǎn)錄組平臺

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