廣義上來說,目前一共有4種解析“空間性轉(zhuǎn)錄組”的策略:2.第一種是利用計算機算法,根據(jù)單細胞轉(zhuǎn)錄組數(shù)據(jù)來模擬重構(gòu)組織的空間形態(tài)。例如Seurat,這是一個在單細胞數(shù)據(jù)分析中***用到的R包,我們可以利用scRNA-seq數(shù)據(jù),加上對markegene進行原位測序的結(jié)果來重構(gòu)組織的空間信息。3.第二種,激光顯微切割+二代測序(LCM+NGS)。這種技術(shù)對儀器和實驗人員的操作要求較高,而且獲取的通量也比較低,如果組織非常珍貴或者研究的內(nèi)容十分精細,可以考慮這個。但是這種策略比較難被官方干運用。4.第三種策略,就是基于高分辨圖像的原位測序。**經(jīng)典的是smFISH當然,這種方法的通量比較低。當然隨著技術(shù)的發(fā)現(xiàn),剛發(fā)布的FISH-seq技術(shù)通過多輪雜交的方式,已經(jīng)把測序通量提高到了10000+個轉(zhuǎn)錄本。5.***就是“基于空間條形碼(spatialbarcodes)的空間轉(zhuǎn)錄組技術(shù)。本文主要討論的也就是這種技術(shù)。后面主要討論的都是基于這種策略。 空間轉(zhuǎn)錄組細胞通訊分析方法簡介及實操。江西空間轉(zhuǎn)錄組使用
基于原位測序的空間轉(zhuǎn)錄組技術(shù)?;谠粶y序(ISS)的方法通過測序產(chǎn)生空間轉(zhuǎn)錄組信息,這種方法只依靠連接酶連接兩段DNA—一段已知序列的引物和一個探針與模板匹配,不匹配的探針就會被洗掉。2013年開發(fā)的ISS中,每個探針使用一個查詢堿基來測序基因條形碼。FISSEQ和后來的EXeq使用了SOLiD,每個探針使用兩個查詢堿基來測序環(huán)化和RCA擴增的cDNAs。在STARmap中,基因條形碼由SEDAL測序,其中還使用了兩個類似固體的查詢堿基來避免錯誤。BARseq還用基因條形碼放大了RCA探針?;贗SS技術(shù)的優(yōu)勢包括:單細胞分辨率、亞細胞轉(zhuǎn)錄物定位和可應(yīng)用于更大的組織區(qū)域。缺點是:檢測效率較低。廣東空間轉(zhuǎn)錄組質(zhì)量10x Genomics公司宣布了新一代FFPE空間轉(zhuǎn)錄組商業(yè)化解決方案。
盡管前傳時代的空間技術(shù)被迅速棄用,但其思想和方法是當今時代空間轉(zhuǎn)錄組學(xué)發(fā)展的基礎(chǔ)。在過去的 5 年中,隨著眾多新技術(shù)的出現(xiàn)和 10x 公司 Visium 技術(shù)解決方案的商業(yè)化普及,該領(lǐng)域得到了快速的發(fā)展。一、實驗技術(shù)有待改進。我們可以做更多的事情來改善實驗技術(shù)。例如 組織切片技術(shù)的發(fā)展、 smFISH 和 ISS 技術(shù)的實驗技術(shù)優(yōu)化、高效率的計算工具實現(xiàn)真正的 3D 空間轉(zhuǎn)錄組或者空間時序轉(zhuǎn)錄組等。二,數(shù)據(jù)庫的建立。盡管當前空間轉(zhuǎn)錄組的數(shù)據(jù)在快速地增長,但尚未有對應(yīng)的數(shù)據(jù)庫來對這些數(shù)據(jù)進行匯總集成。
10x Genomics空間轉(zhuǎn)錄組技術(shù)的準確性高嗎?下圖是一個將10x Genomics空間轉(zhuǎn)錄組技術(shù)應(yīng)用于小鼠海馬體研究的案例。A圖為腦組織切片的HE染色結(jié)果,從10x Genomics空間轉(zhuǎn)錄組分析結(jié)果中,可以清晰看到Tmsb4x(B圖)和Selenow(C圖)在海馬體區(qū)域高表達,和已知的研究結(jié)果一致性較高。開展10x Genomics空間轉(zhuǎn)錄組需要做哪些準備?空間轉(zhuǎn)錄組是一項十分前沿的技術(shù),涉及到很多細節(jié)方面的準備工作,例如組織類型的選擇、前期預(yù)實驗的設(shè)計、病理區(qū)域的確認等一系列內(nèi)容。而且實驗中存在很多不確定性因素,處理不慎容易導(dǎo)致整個項目失敗。通過空間轉(zhuǎn)錄組技術(shù)可獲取組織中具體的位置轉(zhuǎn)錄信息,為研究和診斷提供有效數(shù)據(jù)支撐。
歐易生物高級技術(shù)支持陳老師首先給大家介紹了空間轉(zhuǎn)錄組學(xué)的發(fā)展歷程、測序流程及原理。緊接著,歐易生物技術(shù)支持姚老師針對目前空間轉(zhuǎn)錄組學(xué)發(fā)表的一系列高分文章進行了方案設(shè)計的解析。姜老師給大家詳細介紹了空間轉(zhuǎn)錄組項目樣本準備、切片、貼片等實驗過程及注意事項,并帶領(lǐng)大家到實驗室實地觀摩了整個實驗過程,并就其中細節(jié)進行了講解。董老師針對空間轉(zhuǎn)錄組10x Space Ranger的分析原理及結(jié)果進行了詳細解析,并介紹了使用Seurat包進行數(shù)據(jù)挖掘的標準分析流程??臻g轉(zhuǎn)錄組的組學(xué)板塊包括cDNA的合成、擴增、接頭連接和測序,記錄切片的轉(zhuǎn)錄本信息和空間位置信息 。空間轉(zhuǎn)錄組做什么
空間轉(zhuǎn)錄組數(shù)據(jù)分析軟件開發(fā)語言統(tǒng)計情況。江西空間轉(zhuǎn)錄組使用
**近,空間轉(zhuǎn)錄組學(xué)研究炙手可熱。細胞及其在組織樣本中的相對位置之間的關(guān)系對于理解疾病病理可能至關(guān)重要??臻g轉(zhuǎn)錄組學(xué)是一項開創(chuàng)性的技術(shù),它使科學(xué)家能夠測量組織樣本中的所有基因活性,并繪制出發(fā)生該活性的位置的圖。該技術(shù)已經(jīng)導(dǎo)致了新發(fā)現(xiàn),這些新發(fā)現(xiàn)將有助于幫助科學(xué)家更好地了解生物過程和疾病。10x Genomics空間轉(zhuǎn)錄組技術(shù)可以應(yīng)用于**、免疫、發(fā)育、神經(jīng)和病理等研究方向。歐易生物具有上百例空間轉(zhuǎn)錄組項目執(zhí)行經(jīng)驗,致力通過質(zhì)量的服務(wù),助力各位科研工作者取得新的突破。江西空間轉(zhuǎn)錄組使用
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