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泰州哺乳動物細(xì)胞生長培養(yǎng)基

來源: 發(fā)布時間:2023-02-19

胎牛血清(FoetalBovineSerum,簡稱FBS):是采自5-8個月胎齡牛胚胎中的胎血。此時胎牛各臟器正處生長分化階段,血中含有豐富的生長發(fā)育因子,非常適合各種細(xì)胞的培養(yǎng),一旦胚胎發(fā)育完全這些因子自動消失。因此8個月胎齡以上的牛胚胎,已接近足月,不能作為胎牛血清的原料來使用。有下列情況者,對血清內(nèi)有害元素應(yīng)格外留意篩選:1.養(yǎng)干細(xì)胞時,干細(xì)胞對內(nèi)有害元素非常敏感,如果血清中內(nèi)有害元素≥3EU/ml時,干細(xì)胞很容易死亡。很多使用者,在血清在試用前,就通過提早審核該批次《檢測報告》,以決定是否入圍進(jìn)行試用。2.養(yǎng)免疫細(xì)胞時,過高的內(nèi)有害元素可誘導(dǎo)免疫細(xì)胞釋放炎癥因子,抑制小鼠紅細(xì)胞集落的形成等。3.基因敲除相關(guān)的細(xì)胞實(shí)驗(yàn),培養(yǎng)的細(xì)胞要盡可能保持其原始狀態(tài),任何引導(dǎo)細(xì)胞衰老或凋亡的試劑,都會讓后續(xù)的實(shí)驗(yàn)結(jié)果“失之毫厘,謬以千里”。在準(zhǔn)備血清和其他試劑時,選擇極低的內(nèi)有害元素(更好≤1EU/ml),對實(shí)驗(yàn)至關(guān)重要。胎牛血清能識別并結(jié)合維生素、脂類、金屬和其他元素等,能調(diào)節(jié)它們所結(jié)合分子的活力。泰州哺乳動物細(xì)胞生長培養(yǎng)基

小牛血清和胎牛血清有何區(qū)別與注意事項(xiàng)?來源不同:胎牛血清(FetalBovineSerum,F(xiàn)BS)是在屠宰懷孕母牛的時候,通過心臟穿刺采集血液獲取的胎牛的血清,新生牛(小牛)血清(Calfserum,CS)采自出生10至14天的小牛。組份與比例不同:兩者所含的促細(xì)胞生長因子、促貼附因子、元素及其他活性物質(zhì)等組份與比例不同,用途與用法不同:某些細(xì)胞必需胎牛血清才能生長,而有些細(xì)胞只需小牛血清即可,使用濃度不同,一般在5%-10%,有特殊要求的濃度在20%。血清保存和使用須注意:血清應(yīng)保存在-5℃至-20℃,若存放在4℃不可超過一個月。解凍血清時,應(yīng)先將血清至于2-8℃冰箱,并經(jīng)常搖勻使之溶解,然后至室溫放置使之升溫,基本不可將冷凍的血清直接放入37℃水浴或者溫箱中,如放在37℃解凍,顏色加深,粘稠度也會增加,血清在解凍和熱滅活后,應(yīng)按用量分裝并于-20℃保存,避免反復(fù)凍融。徐州胎牛血清胎牛血清有些情況下結(jié)合蛋白質(zhì)能與有毒金屬和熱原質(zhì)結(jié)合,起到消毒作用。

血清中出現(xiàn)沉淀的原因很多:反復(fù)的凍融會使血清脂蛋白發(fā)生變性造成渾濁,可通過分裝成單次用量減少凍融來盡量避免此種情況。血清是在低溫環(huán)境下迅速加工以保持其生長特性,血清中遺留的一些纖維蛋白原在解凍時會轉(zhuǎn)化成纖維蛋白。過量的纖維蛋白在血清中呈現(xiàn)為可見的絮狀物質(zhì),可通過400xg離心移除。不建議通過過濾血清來移除絮狀物質(zhì),因?yàn)闉V器可能堵塞,或者意外截留到重要的蛋白質(zhì)。牛血清產(chǎn)品檢測項(xiàng)目包括內(nèi)有害元素、細(xì)菌、菌體、霉菌、支原體和噬菌體檢測嗎?胎牛血清采用非常嚴(yán)謹(jǐn)?shù)臉?biāo)準(zhǔn)檢測過這些相關(guān)微生物的污染,具體可以參加每批次的CoA。什么是γ輻照的血清(胎牛血清)?γ輻照的血清通過暴露于放射性60Co產(chǎn)生的25-40kGy劑量的γ射線來滅活病毒和其他外來微生物(比如支原體)。γ輻照處理不影響血清的理化性質(zhì)或細(xì)胞培養(yǎng)性能。

胎牛血清的保存方法:1、需要長期保存的胎牛血清須儲存于-20℃-70℃低溫冰箱中。4℃冰箱中保存時間切勿超過1個月。切勿將血清在37℃放置太久,否則血清會變得渾濁,同時血清中的有效成分會被破壞,而影響血清質(zhì)量。如果一次無法用完一瓶,可將40~45ml分裝于無菌50ml離心管中。由于血清結(jié)冰時體積會增加約10%,因此,血清在凍入低溫冰箱前,必須預(yù)留一定體積空間,否則易發(fā)生污染或玻璃瓶凍裂。2、一般廠商提供的血清為無菌,無需再過濾除菌。如發(fā)現(xiàn)血清有懸浮物,則可將血清加入培養(yǎng)液內(nèi)一起過濾,切勿直接過濾血清。3、胎牛血清解凍需采用逐步解凍法:-20℃至-70℃低溫冰箱中的血清放入4℃冰箱中溶解1天.然后移入室溫,待全部溶解后再分裝,一般以50ml無菌離心管可分裝40~45ml。在溶解過程中須規(guī)則搖晃均勻(小心勿造成氣泡),使溫度與成分均一,減少沉淀的發(fā)生。切勿直接將血清從-20℃進(jìn)入37℃解凍,這樣因溫度改變太大,容易造成蛋白質(zhì)凝集而出現(xiàn)沉淀。胎牛血清免受蛋白酶、毒性物質(zhì)、PH值波動、機(jī)械剪切力、氧化及自由基的損傷。

血清是基礎(chǔ)培養(yǎng)基中極為重要的細(xì)胞生長和粘附因子、元素、脂質(zhì)和礦物質(zhì)來源。此外,血清還可調(diào)節(jié)細(xì)胞膜通透性,并可作為向細(xì)胞內(nèi)運(yùn)送脂質(zhì)、酶、微量營養(yǎng)素和微量元素的載體。牛血清是細(xì)胞培養(yǎng)中用量更大的天然培養(yǎng)基,含有豐富的細(xì)胞生長必須的營養(yǎng)成份,具有極為重要的功能。牛血清分為小牛血清、新牛血清、胎牛血清。胎牛血清(FetalBovineSerum)是通過無菌手術(shù)剖腹后取胎,穿刺心臟采集血液制成。胎牛血清中所含的對培養(yǎng)細(xì)胞有害的成分(抗體等)非常少,故質(zhì)量更高。需要長期保存的胎牛血清須儲存于-20℃-70℃低溫冰箱中。徐州胎牛血清

胎牛血清的完全培養(yǎng)基仍然是目前主流的細(xì)胞培養(yǎng)體系。泰州哺乳動物細(xì)胞生長培養(yǎng)基

胎牛血清給細(xì)胞提供的益處主要體現(xiàn)在6個方面:1、提供細(xì)胞生長所需的天然元素或天然的生長因子。2、提供天然的結(jié)合蛋白,能識別氨基酸、脂質(zhì)、金屬離子和元素等,能結(jié)合并調(diào)節(jié)它們的活性。已知清蛋白(albumin)即具有上述功能,并對細(xì)胞代謝、生物合成、增殖和存活具有潛在的影響。又如胎牛血清中富含胎球蛋白(Fetuin),具有多個鈣離子結(jié)合位點(diǎn),因而能調(diào)節(jié)和維持血清中的鈣離子濃度。3、天然含有粘附蛋白等細(xì)胞外基質(zhì)成分,促進(jìn)細(xì)胞的附著、鋪展。4、提供消毒功能。這主要通過血清中的某些蛋白與有毒的金屬離子結(jié)合來完成的。如金屬硫蛋白,對多種重金屬有高度親和性,并可清理細(xì)胞生長環(huán)境中的氧自由基(·O),具有很強(qiáng)的抗氧化活性,可防止細(xì)胞衰老。5、提供酸堿度緩沖的作用,以及維持滲透壓。6、提供蛋白酶抑制劑,使細(xì)胞免受蛋白酶的損傷。因此在細(xì)胞消化時,常用含血清的培養(yǎng)液終止胰酶對細(xì)胞的作用。泰州哺乳動物細(xì)胞生長培養(yǎng)基

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