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細(xì)胞和組織培養(yǎng)為什么需要使用血清?血清通常作為補(bǔ)充劑,以2-10%的濃度加入培養(yǎng)基中,為細(xì)胞提供綜合營(yíng)養(yǎng)、元素、生長(zhǎng)和附著因子。血清還可作為細(xì)胞培養(yǎng)系統(tǒng)的緩沖液,避免各種因素(包括pH變化、蛋白水解活性或重金屬、內(nèi)毒等)干擾細(xì)胞生長(zhǎng)或產(chǎn)生毒性作用。血清是如何加工的?血清采集后冷凍運(yùn)輸至加工工廠(chǎng),解凍并檢測(cè)細(xì)菌、病毒、內(nèi)有害元素和血紅蛋白含量等多項(xiàng)指標(biāo)。選擇更優(yōu)良的血清在無(wú)菌環(huán)境下進(jìn)行系列膜過(guò)濾無(wú)菌處理,然后在無(wú)菌環(huán)境下進(jìn)行分裝并快速凍存于-20°C,在所有批次驗(yàn)證達(dá)到或找過(guò)QC標(biāo)準(zhǔn)之前隔離存放。由于胎牛血清與新生牛血清存在細(xì)微差異,因此它們的用途與用法也不盡相同。海寧特級(jí)胎牛血清 Fetal Bovine Serum(Superfine)
胎牛血清的保存方法:熱滅活是指56℃,30分鐘加熱已完全解凍的血清。加熱過(guò)程中須規(guī)則搖晃均勻.此熱處理的目的是使血清中的補(bǔ)體成分滅活。除非必須,一般不建議作此熱處理,因?yàn)闊崽幚頃?huì)造成血清沉淀物明顯增多,而且還會(huì)影響血清的質(zhì)量。補(bǔ)體參與反應(yīng)有:細(xì)胞毒作用,平滑肌細(xì)胞收縮,肥大細(xì)胞和血小板釋放組胺,增強(qiáng)吞噬作用,促進(jìn)淋巴細(xì)胞和巨噬細(xì)胞發(fā)生化學(xué)趨化和活化。血清中的沉淀物絮狀物:主要是血清中的脂蛋白變性及解凍后血清中纖維蛋白造成,這些絮狀物不會(huì)影響血清本身的質(zhì)量??捎秒x心3000rpm,5分鐘去除,也可不用處理。顯微鏡下"小黑點(diǎn)":經(jīng)過(guò)熱處理過(guò)的血清,沉淀物的形成會(huì)明顯增多。有些沉淀物在顯微鏡下觀察象"小黑點(diǎn)",常誤認(rèn)為血清受污染。一般情況下,此小黑點(diǎn)不會(huì)影響細(xì)胞生長(zhǎng),但如果懷疑血清質(zhì)量,則應(yīng)立即停止使用,更換另一批號(hào)的血清。玉環(huán)McCoy's 5A培養(yǎng)基胎牛血清可以使細(xì)胞傳代時(shí),將剩余的胰蛋白酶失去活性,因此能夠起到保護(hù)細(xì)胞不受到傷害的作用。
胎牛血清和新生牛血清的區(qū)別是什么?取血年齡不同:牛血清按照牛取血時(shí)間或牛齡可進(jìn)行區(qū)分。胎牛血清(FoetalBovineSerum,簡(jiǎn)稱(chēng)FBS)指的是取自未出生,母牛剖腹得來(lái)的胎牛。國(guó)產(chǎn)胎牛血清(并無(wú)明確定義,但通常以此稱(chēng))的指的是出生4-6小時(shí),且未進(jìn)行哺乳(unsuckled)進(jìn)食的牛,有時(shí)還稱(chēng)作國(guó)產(chǎn)新生牛。新生牛血清(NewbornCalfSerum,簡(jiǎn)稱(chēng)NBCS)指的是出生14天-3個(gè)月進(jìn)行取血的牛。成年牛血清(AdultBovineSerum,簡(jiǎn)稱(chēng)ABS)指的是取血時(shí)牛齡通常超過(guò)12個(gè)月的牛。以上取血牛齡的差異主要是受當(dāng)?shù)貒?guó)家畜牧業(yè)的發(fā)展及法規(guī)限制影響,因?yàn)榕Q酁樾竽翗I(yè)副產(chǎn)業(yè),并未有專(zhuān)門(mén)為取血而養(yǎng)的牛。
如何避免血清中產(chǎn)生沉淀?按如下操作可避免沉淀的產(chǎn)生:(1)解凍血清時(shí),請(qǐng)隨時(shí)將之搖晃均勻,使溫度及成分均一,減少沉淀的發(fā)生。(2)血清分裝凍存時(shí),須規(guī)則搖晃均勻(小心勿造成氣泡),使溫度與成分均一。(3)勿直接由-20℃直接至37℃解凍,因溫度改變太大,容易造成蛋白質(zhì)凝結(jié)而發(fā)生沉淀。(4)勿將血清置于37℃太久,否則血清會(huì)變得渾濁,同時(shí)血清中許多較不穩(wěn)定的成份也會(huì)因此受到破壞,從而影響血清的品質(zhì)。(5)血清的熱滅活非常容易造成沉淀物的增多,若非必要,可以無(wú)須做此步驟。(6)若必須做血清的熱滅活,請(qǐng)遵守56℃,30分鐘的原則,并且隨時(shí)搖晃均勻。溫度過(guò)高,時(shí)間過(guò)久或搖晃不均勻,都會(huì)造成沉淀物的增多。胎牛血清有些情況下結(jié)合蛋白質(zhì)能與有毒金屬和熱原質(zhì)結(jié)合,起到消毒作用。
胎牛血清作為細(xì)胞生長(zhǎng)不可缺少的重要營(yíng)養(yǎng)來(lái)源一直備受科研人員重視,那么胎牛血清在參與細(xì)胞培養(yǎng)實(shí)驗(yàn)都發(fā)揮著什么作用呢?胎牛血清,是胎牛血漿去除纖維蛋白而形成的一種很復(fù)雜的混合物,其組成成份雖大部分已知,但還有一部分尚不清楚,且血清組成及含量常隨供血?jiǎng)游锏男詣e、年齡、生理?xiàng)l件和營(yíng)養(yǎng)條件不同而異。血清中含有各種血漿蛋白、多肽、脂肪、碳水化合物、生長(zhǎng)因子、元素、無(wú)機(jī)物等,這些物質(zhì)對(duì)促進(jìn)細(xì)胞生長(zhǎng)或抑制生長(zhǎng)活性是達(dá)到生理平衡的。牛血清是細(xì)胞培養(yǎng)中用量很大的天然培養(yǎng)基,含有豐富的細(xì)胞生長(zhǎng)必需的營(yíng)養(yǎng)成份,常用于動(dòng)物細(xì)胞的體外培養(yǎng),具有極為重要的功能:提供維持細(xì)胞指數(shù)生長(zhǎng)的元素、基礎(chǔ)培養(yǎng)基中沒(méi)有或量很少的營(yíng)養(yǎng)物,以及主要的低分子營(yíng)養(yǎng)物。胎牛血清是細(xì)胞培養(yǎng)中用量很大的天然培養(yǎng)基。麗水小牛血清
胎牛血清中含有各種血漿蛋白、多肽、脂肪、碳水化合物、生長(zhǎng)因子、元素、無(wú)機(jī)物等。海寧特級(jí)胎牛血清 Fetal Bovine Serum(Superfine)
胎牛血清(FBS)用作真核細(xì)胞體外細(xì)胞培養(yǎng)的生長(zhǎng)補(bǔ)充劑。動(dòng)物血清(牛血清和非牛血清)都用于細(xì)胞培養(yǎng),其中使用更普遍的是胎牛血清(FBS)。FBS含有生長(zhǎng)因子和極低水平的抗體,因此在許多不同的細(xì)胞培養(yǎng)應(yīng)用中具有多功能性。在FBS中發(fā)現(xiàn)了1000多種成分,包括蛋白質(zhì),電解質(zhì),脂質(zhì),碳水化合物,元素,酶和其他未定義的成分,這些成分在許多培養(yǎng)條件下對(duì)于支持細(xì)胞生長(zhǎng)都是必需的。制造環(huán)境中的學(xué)術(shù)和工業(yè)研究人員以及科學(xué)家都在其細(xì)胞培養(yǎng)基中使用胎牛血清(FBS)進(jìn)行調(diào)查,包括生物技術(shù)研究/生產(chǎn),疫苗制造,克隆和動(dòng)物診斷。海寧特級(jí)胎牛血清 Fetal Bovine Serum(Superfine)
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