細(xì)胞培養(yǎng)中胎牛血清的重要作用:許多臨床和做科研的小伙伴們都要涉及到細(xì)胞培養(yǎng),在細(xì)胞培養(yǎng)實(shí)驗(yàn)中,血清無(wú)疑成為影響實(shí)驗(yàn)成功與否的重要因素,而在眾多血清之中,牛血清是更為常用的。牛血清是細(xì)胞培養(yǎng)中用量更大的天然培養(yǎng)基,其中含有豐富的細(xì)胞生長(zhǎng)所必須的營(yíng)養(yǎng)成分,常用于動(dòng)物細(xì)胞的體外培養(yǎng),具有極為重要的功能。牛血清是一種成分復(fù)雜的混合物,而且血清的組成及含量通常隨供血?jiǎng)游锏男詣e、年齡、生理?xiàng)l件和營(yíng)養(yǎng)條件不同而存在差異。牛血清主要成分有蛋白質(zhì),多肽類(lèi),元素類(lèi),其他成分如氨基酸、葡萄糖、微量元素等。胎牛血清應(yīng)取自剖腹產(chǎn)的胎牛;新牛血清取自出生24小時(shí)之內(nèi)的新生牛;小牛血清取自出生10-30天的小牛。舟山胎牛血清
胎牛血清、新生牛血清、小牛血清區(qū)別三者之間的區(qū)別:1、采集血液時(shí)間不同,胎牛血清(FetalBovineSerum)是在母牛懷孕5-8個(gè)月時(shí),通過(guò)胎牛心臟穿刺采集血液獲取的血清。新生牛血清(NewbornCalfSerum)是來(lái)自剛出生~出生后2周內(nèi)的新生牛靜脈取血。小牛血清(CalfSerum)采自出生后2周至1年內(nèi)的小牛靜脈取血。2、組份與比例不同,兩者所含的促細(xì)胞生長(zhǎng)因子、促貼附因子、元素及其他活性物質(zhì)等組份與比例不同。胎牛血清尤其含有胚胎發(fā)育所必需的生長(zhǎng)因子。一些生長(zhǎng)因子到胎牛10個(gè)月時(shí)就消失了。用途與用法不同,某些細(xì)胞必需胎牛血清才能生長(zhǎng),而有些細(xì)胞只需小牛血清即可。使用濃度一般在5%-10%,有特殊要求的濃度在**MEM (High Glucose)供貨商真正的胎牛血清,一般表現(xiàn)出微紅色或橘紅色。
胎牛血清使用中的常見(jiàn)問(wèn)題:血清中包含絮狀沉淀,它們是什么,怎么處理?沉淀包含纖維蛋白和脂蛋白。這是正常特性,不會(huì)影響產(chǎn)品性質(zhì)。要除去沉淀,離心血清(400g,1-2分鐘)或者簡(jiǎn)單的讓其沉淀在瓶子底部,將血清小心的轉(zhuǎn)移到另一個(gè)無(wú)菌瓶里(一般不建議采用過(guò)濾的方法除去沉淀,因?yàn)槌恋頃?huì)堵塞濾膜而無(wú)法過(guò)濾)。大多情況輕輕搖動(dòng)沉淀并加熱至37℃就會(huì)再溶解。所以,使用產(chǎn)品時(shí)要搖動(dòng)并加熱血清至37℃,沉淀會(huì)自然消失。實(shí)驗(yàn)室如何選擇適合的血清?國(guó)內(nèi)一致認(rèn)為HYCLONE的血清是更好的,但是根據(jù)我在北美的經(jīng)歷,國(guó)外一般認(rèn)為GIBCO比HYCLONE好,所以并不是價(jià)格決定質(zhì)量,但是總的來(lái)說(shuō)這兩種價(jià)格普遍偏貴,一般不是太嬌氣的細(xì)胞,國(guó)產(chǎn)的就夠用了。此外,由于國(guó)內(nèi)HYCLONE,GIBCO并沒(méi)有生產(chǎn)線,我們只能從代理商那里買(mǎi),而代理商又魚(yú)龍混雜,所以買(mǎi)到假貨的可能性也很大。
為什么使用胎兒血清而不是新生兒血清或成人血清?胎兒血清含有較多的生長(zhǎng)因子,丙種球蛋白(即抗體)含量較低,非胎兒血清也有。這些很重要,因?yàn)樯L(zhǎng)因子促進(jìn)細(xì)胞存活和增殖,而抗體可以與培養(yǎng)的細(xì)胞結(jié)合。此外,與成人或新生兒相比,胎兒血清中的補(bǔ)體蛋白(補(bǔ)體)含量較低。這些補(bǔ)體具有溶解培養(yǎng)細(xì)胞和干擾免疫測(cè)定的不良作用。血清和血漿均來(lái)自全血,通過(guò)離心去除包括紅細(xì)胞在內(nèi)的成分。血漿和血清之間的區(qū)別在于,凝血蛋白存在于血漿中,但已從血清中去除。血漿一般是通過(guò)在離心前向血液中加入抗凝劑來(lái)制備的,但不會(huì)去除凝血蛋白。通過(guò)在離心前使血液凝固或通過(guò)普遍/漸進(jìn)離心來(lái)制備血清。因此,與凝血相關(guān)的纖維蛋白原和蛋白質(zhì)不存在于血清中。胎牛血清應(yīng)該存放在-20℃環(huán)境的地方。
胎牛血清應(yīng)該怎么選?穩(wěn)定性,F(xiàn)BS作為其他行業(yè)的副產(chǎn)品,其生產(chǎn)在本質(zhì)上會(huì)受到天氣、食物供應(yīng)、經(jīng)濟(jì)條件和牛群規(guī)模及病情等各種因素的影響,導(dǎo)致血清的供應(yīng)可能出現(xiàn)貨源、價(jià)格及批次間的不穩(wěn)定性,從而造成實(shí)驗(yàn)的不順甚至實(shí)驗(yàn)失敗。在過(guò)去,國(guó)內(nèi)外已有多個(gè)實(shí)驗(yàn)室出現(xiàn)過(guò)因血清批間差異大而導(dǎo)致實(shí)驗(yàn)結(jié)果無(wú)法重復(fù)的情況,浪費(fèi)了巨大的時(shí)間和金錢(qián)成本。因此,找到穩(wěn)定提供同批次FBS的供應(yīng)商,對(duì)于確保自己細(xì)胞實(shí)驗(yàn)結(jié)果的真實(shí)性和可重復(fù)性具有重要意義,而且花在重復(fù)實(shí)驗(yàn)或檢驗(yàn)新批次上的時(shí)間將很大減少。胎牛血清是細(xì)胞貼壁、鋪展在塑料培養(yǎng)基質(zhì)上所需因子來(lái)源。金華Masson三色染色試劑盒
胎牛血清解凍需采用逐步解凍法:-20℃至-70℃低溫冰箱中的血清放入4℃冰箱中溶解1天。舟山胎牛血清
血清是由血漿去除纖維蛋白而形成的一種很復(fù)雜的混合物,其組成成分雖大部分已知,但還有一部分尚不清楚,且血清組成及含量常隨供血?jiǎng)游锏男詣e、年齡、生理?xiàng)l件和營(yíng)養(yǎng)條件不同而異。血清中含有各種血漿蛋白、多肽、脂肪、碳水化合物、生長(zhǎng)因子、元素、無(wú)機(jī)物等,這些物質(zhì)對(duì)促進(jìn)細(xì)胞生長(zhǎng)或抑制生長(zhǎng)活性是達(dá)到生理平衡的。牛血清是細(xì)胞培養(yǎng)中用量更大的天然培養(yǎng)基,含有豐富的細(xì)胞生長(zhǎng)必須的營(yíng)養(yǎng)成分,常用于動(dòng)物細(xì)胞的體外培養(yǎng),具有極為重要的功能。1.提供對(duì)維持細(xì)胞指數(shù)生長(zhǎng)的元素,基礎(chǔ)培養(yǎng)基中沒(méi)有或量很少的營(yíng)養(yǎng)物,以及主要的低分子營(yíng)養(yǎng)物。2.提供結(jié)合蛋白,能識(shí)別維生素、脂類(lèi)、金屬和其他元素等,能結(jié)合或調(diào)變它們所結(jié)合的物質(zhì)活力。3.有些情況下結(jié)合蛋白質(zhì)能與有毒金屬和熱原質(zhì)結(jié)合,起到消毒作用。4.是細(xì)胞貼壁、鋪展在塑料培養(yǎng)基質(zhì)上所需因子來(lái)源。舟山胎牛血清
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