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活性炭處理胎牛血清的應(yīng)用:活性炭處理胎牛血清主要用于受體研究和雌元素相關(guān)的細(xì)胞研究實(shí)驗(yàn)。同時活性炭處理胎牛血清極大的降低了多種元素和生長因子,減少了影響細(xì)胞生化分析的干擾因子。性炭處理胎牛血清減少了血清中的類固醇類化合物,3x100nm無菌過濾內(nèi)有害元素≤10EU/mL,血紅素≤20mg/dL。胎牛血清是一種性狀、外觀淺黃色澄清、無溶血、無異物稍粘稠液體。胎牛血清應(yīng)取自剖腹產(chǎn)的胎牛;新牛血清取自出生24小時之內(nèi)的新生牛;小牛血清取自出生10-30天的小牛。顯然,胎牛血清是品質(zhì)更高的,因?yàn)樘ヅ_€未接觸外界,血清中所含的抗體、補(bǔ)體等對細(xì)胞有害的成分更少。有些胎牛血清沒有預(yù)老化,儲存在2-8℃時,血清中的各種蛋白和脂蛋白可能聚集而形成沉淀或可見的混濁。永康標(biāo)準(zhǔn)胎牛血清Fetal Bovine Serum(Standard)
血清是基礎(chǔ)培養(yǎng)基中極為重要的細(xì)胞生長和粘附因子、元素、脂質(zhì)和礦物質(zhì)來源。此外,血清還可調(diào)節(jié)細(xì)胞膜通透性,并可作為向細(xì)胞內(nèi)運(yùn)送脂質(zhì)、酶、微量營養(yǎng)素和微量元素的載體。牛血清是細(xì)胞培養(yǎng)中用量更大的天然培養(yǎng)基,含有豐富的細(xì)胞生長必須的營養(yǎng)成份,具有極為重要的功能。牛血清分為小牛血清、新牛血清、胎牛血清。胎牛血清(FetalBovineSerum)是通過無菌手術(shù)剖腹后取胎,穿刺心臟采集血液制成。胎牛血清中所含的對培養(yǎng)細(xì)胞有害的成分(抗體等)非常少,故質(zhì)量更高。嵊州培養(yǎng)基真正的胎牛血清,一般表現(xiàn)出微紅色或橘紅色。
胎牛血清是一種性狀、外觀淺黃色澄清、無溶血、無異物稍粘稠液體。胎牛血清應(yīng)取自剖腹產(chǎn)的胎牛;新牛血清取自出生24小時之內(nèi)的新生牛;小牛血清取自出生10-30天的小牛。顯然,胎牛血清是品質(zhì)更高的,因?yàn)樘ヅ_€未接觸外界,血清中所含的抗體、補(bǔ)體等對細(xì)胞有害的成分更少。胎牛血清各項(xiàng)質(zhì)量指標(biāo)符合2005版《中華人民共和國藥典》第三部附錄的要求。1、性狀、外觀淺黃色澄清、無溶血、無異物稍粘稠液體。2、蛋白質(zhì)含量3.5%~5.0%(w/v)3、血紅蛋白含量≤0.02%(w/v)4、無菌檢驗(yàn):陰性。5、支原體檢驗(yàn):陰性。6、細(xì)菌內(nèi)有害元素≤5(EU/ml)7、牛腹瀉病毒,陰性,8、大腸桿菌噬菌體,陰性,9、支持細(xì)胞增殖(Sp2/0-Ag14)生長曲線(接種濃度)更大增殖濃度≥2.5×106個/ml,細(xì)胞倍增時間≤15h,克隆率≥85%。
什么是優(yōu)良的胎牛血清?外觀,好的血清應(yīng)是透明清亮,土黃色或棕黃色,無沉淀或極少沉淀,比較粘稠。如發(fā)現(xiàn)血清渾濁,不透明,含許多沉淀物,說明血清污染或血清中的蛋白質(zhì)變性;若棕紅色,說明血清中的血紅蛋白含量太高,有溶血現(xiàn)象??偟鞍缀浚ヅQ逡话惴秶?0-40mg/ml,數(shù)值偏高,說明采集血液的牛齡偏大,不是胎牛;數(shù)值偏低,表明血清可能摻水了。血紅蛋白,標(biāo)準(zhǔn)為不高于20mg/dl,顏色越紅,數(shù)值越高;反之,數(shù)值越低。pH,國產(chǎn)血清,大多高于7.5,進(jìn)口胎牛血清,大多低于7.5,具體原因未知,可能和牛齡有關(guān),這也能用來初步鑒別血清的來源。胎牛血清有些情況下結(jié)合蛋白質(zhì)能與有毒金屬和熱原質(zhì)結(jié)合,起到消毒作用。
為什么有些血清是熱滅活的?如何熱滅活?哺乳動物血清中天然存在的補(bǔ)體蛋白參與細(xì)胞溶解事件、收縮平滑肌、從肥大細(xì)胞和血小板中釋放組胺和激發(fā)淋巴細(xì)胞和髓細(xì)胞。熱滅活破壞了血清中補(bǔ)體的活性,因此免疫學(xué)應(yīng)用,培養(yǎng)胚胎干細(xì)胞、昆蟲細(xì)胞和平滑肌細(xì)胞時推薦使用。熱滅活方法是在56°C水浴中處理30分鐘,并每隔大約10分鐘旋轉(zhuǎn)一次瓶子。為了保持精確,可使用一個類似大小的瓶子作為對照,對照瓶內(nèi)放入同等體積的水,并放置一個溫度計(jì),在溫度到達(dá)56°C時開始計(jì)時30分鐘。熱滅活過程必須小心控制,避免血清中支持細(xì)胞和組織繁殖的關(guān)鍵蛋白組分發(fā)生降解。胎牛血清對促進(jìn)細(xì)胞生長或抑制生長活性是達(dá)到生理平衡的。義烏RPMI 1640 Medium
胎牛血清是一種性狀、外觀淺黃色澄清、無溶血、無異物稍粘稠液體。永康標(biāo)準(zhǔn)胎牛血清Fetal Bovine Serum(Standard)
胎牛血清都有哪些重要的指標(biāo):總蛋白含量,胎牛血清的總蛋白含量一般范圍是30-40mg/ml,數(shù)值偏高,說明采集血液的牛齡偏大,不是胎牛;數(shù)值偏低,表明血清可能摻水了。pH值,根據(jù)藥典,胎牛血清的pH值在7.0-8.0之間,并沒有什么具體依據(jù)把進(jìn)口血清和國產(chǎn)血清用7.5這個分界線界定。滲透壓,胎牛血清滲透壓的檢測一般采用冰點(diǎn)法,滲透壓摩爾濃度(mOsmol/kg):280-360之間。微生物,包括細(xì)菌、霉菌、支原體、噬菌體等。隨著各個品牌血清生產(chǎn)條件的改善提高,細(xì)菌、霉菌等“大型”微生物幾乎能100%控制。支原體通過0.1um3次無菌過濾去除。關(guān)于噬菌體主要是生產(chǎn)環(huán)境過程中帶入,又無法過濾,很難徹底清理,但對血清質(zhì)量影響不大,不過對于工業(yè)生產(chǎn)的客戶來說,往往會采用γ照射的胎牛血清來避免噬菌體。永康標(biāo)準(zhǔn)胎牛血清Fetal Bovine Serum(Standard)
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