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不少小伙伴對于血清的挑選、使用和儲存等方面,都有不少疑惑,我們匯總了一些常見問題,并且針對這些問題,給出了相應(yīng)的建議供大家參考。先來看看關(guān)于血清挑選的部分:如何挑選胎牛血清?1、胎牛血清的標(biāo)準(zhǔn)采集血液時間是5-8月齡的未出生胎牛。2、選購時詢問是否有檢測報告,并注意檢測報告中的各類指標(biāo)。3、注意血清有效期,盡量不買過期血清。4、留心觀察相關(guān)人員是否專業(yè):血清是否全程冷鏈運輸;是否嚴(yán)格儲存在-20℃冰箱中;工作人員對待血清態(tài)度如何;能否提供同一批次血清。胎牛血清能識別并結(jié)合維生素、脂類、金屬和其他元素等,能調(diào)節(jié)它們所結(jié)合分子的活力。永康胎牛血清
胎牛血清與新生牛血清的區(qū)別:組份與比例不同,雖然胎牛血清與新生牛血清的成分并不存在很大的差別,可是諸如促細胞生長因子和促貼附因子等組份并不相同,而且兩者之間的元素以及其他活性物質(zhì)的比例也不同。胎牛血里的生長因子適合牛體內(nèi)各種細胞生長,通常在8個月胎齡后慢慢消失。另外,胎牛血清的免疫球蛋白含量要遠遠低于新生牛血清,胎牛的血清相對來說比較純,所以培養(yǎng)細胞的效果會更佳。用途與用法不同,由于胎牛血清與新生牛血清存在細微差異,因此它們的用途與用法也不盡相同。金華Bouin's固定液胎牛血清蛋白和脂類含量低,表現(xiàn)為稀薄、清淡。
如今已經(jīng)成為各大實驗室“常客”的胎牛血清,是一種采集自新鮮的牛血液的優(yōu)良血清。胎牛血清主要的作用就是提供基本的營養(yǎng)物質(zhì)以及提供接觸和伸展因子,有效避免細胞貼壁受到機械的損傷。如此看來胎牛血清確實發(fā)揮出非常大的作用,那么為了讓其充分發(fā)揮更大的價值該注意哪些事項呢?注意避免沉淀加入培養(yǎng)液,添加胎牛血清的時候要注意避免把沉淀加入培養(yǎng)液,因為如果培養(yǎng)液有沉淀的存在,會使得其中培養(yǎng)的細胞產(chǎn)生大量的黑點,除此之外,細胞的表面還很可能會覆蓋一層油狀物質(zhì),總之出現(xiàn)這樣的情況會極其不利于細胞的正常生長。那么為了更大程度減少血清的損失,可以把所有有沉淀的血清進行收集并做離心處理,之后便可將上清液加入培養(yǎng)液中使用。
為什么有些血清是熱滅活的?如何熱滅活?哺乳動物血清中天然存在的補體蛋白參與細胞溶解事件、收縮平滑肌、從肥大細胞和血小板中釋放組胺和激發(fā)淋巴細胞和髓細胞。熱滅活破壞了血清中補體的活性,因此免疫學(xué)應(yīng)用,培養(yǎng)胚胎干細胞、昆蟲細胞和平滑肌細胞時推薦使用。熱滅活方法是在56°C水浴中處理30分鐘,并每隔大約10分鐘旋轉(zhuǎn)一次瓶子。為了保持精確,可使用一個類似大小的瓶子作為對照,對照瓶內(nèi)放入同等體積的水,并放置一個溫度計,在溫度到達56°C時開始計時30分鐘。熱滅活過程必須小心控制,避免血清中支持細胞和組織繁殖的關(guān)鍵蛋白組分發(fā)生降解。胎牛血清的貼壁因子有助于細胞貼壁,并提供結(jié)合蛋白。
胎牛血清是一種性狀、外觀淺黃色澄清、無溶血、無異物稍粘稠液體。胎牛血清應(yīng)取自剖腹產(chǎn)的胎牛;新牛血清取自出生24小時之內(nèi)的新生牛;小牛血清取自出生10-30天的小牛。顯然,胎牛血清是品質(zhì)更高的,因為胎牛還未接觸外界,血清中所含的抗體、補體等對細胞有害的成分更少。胎牛血清各項質(zhì)量指標(biāo)符合2005版《中華人民共和國藥典》第三部附錄的要求。1、性狀、外觀淺黃色澄清、無溶血、無異物稍粘稠液體。2、蛋白質(zhì)含量3.5%~5.0%(w/v)3、血紅蛋白含量≤0.02%(w/v)4、無菌檢驗:陰性。5、支原體檢驗:陰性。6、細菌內(nèi)有害元素≤5(EU/ml)7、牛腹瀉病毒,陰性,8、大腸桿菌噬菌體,陰性,9、支持細胞增殖(Sp2/0-Ag14)生長曲線(接種濃度)更大增殖濃度≥2.5×106個/ml,細胞倍增時間≤15h,克隆率≥85%。胎牛血清提供對維持細胞指數(shù)生長的元素,基礎(chǔ)培養(yǎng)基中沒有或量很少的營養(yǎng)物,以及主要的低分子營養(yǎng)物。溫州培養(yǎng)基
胎牛血清是營養(yǎng)和能量來源;生長和粘附因子;肽和類固醇元素;載體蛋白。永康胎牛血清
胎牛血清的保存方法:1、需要長期保存的胎牛血清須儲存于-20℃-70℃低溫冰箱中。4℃冰箱中保存時間切勿超過1個月。切勿將血清在37℃放置太久,否則血清會變得渾濁,同時血清中的有效成分會被破壞,而影響血清質(zhì)量。如果一次無法用完一瓶,可將40~45ml分裝于無菌50ml離心管中。由于血清結(jié)冰時體積會增加約10%,因此,血清在凍入低溫冰箱前,必須預(yù)留一定體積空間,否則易發(fā)生污染或玻璃瓶凍裂。2、一般廠商提供的血清為無菌,無需再過濾除菌。如發(fā)現(xiàn)血清有懸浮物,則可將血清加入培養(yǎng)液內(nèi)一起過濾,切勿直接過濾血清。3、胎牛血清解凍需采用逐步解凍法:-20℃至-70℃低溫冰箱中的血清放入4℃冰箱中溶解1天.然后移入室溫,待全部溶解后再分裝,一般以50ml無菌離心管可分裝40~45ml。在溶解過程中須規(guī)則搖晃均勻(小心勿造成氣泡),使溫度與成分均一,減少沉淀的發(fā)生。切勿直接將血清從-20℃進入37℃解凍,這樣因溫度改變太大,容易造成蛋白質(zhì)凝集而出現(xiàn)沉淀。永康胎牛血清
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