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什么是優(yōu)良的胎牛血清?免疫球蛋白,國(guó)產(chǎn)血清的只是定性檢測(cè),結(jié)果也很不準(zhǔn)確,進(jìn)口胎牛血清大多定量檢測(cè)。免疫球蛋白的數(shù)值能完全體現(xiàn)出采集血液的時(shí)的牛齡情況,國(guó)產(chǎn)血清,基本都是新生牛的,血清中容易產(chǎn)生IgM,IgG的含量也偏高,進(jìn)口胎牛血清,不含IgM,IgG的含量也較低。維生素含量,此外,維生素的使用也是要考慮在內(nèi)的。國(guó)內(nèi)外的血清,都不對(duì)維生素進(jìn)行測(cè)試(無四環(huán)素胎牛血清理外)。其中,由于國(guó)外維生素使用較為嚴(yán)格,用量有限,同時(shí)每頭奶牛的產(chǎn)品包括血清都可以追溯源頭,所以國(guó)外胎牛血清不含維生素或者含量極低。但是國(guó)內(nèi)由于維生素使用普遍,血清中殘留量很高,導(dǎo)致國(guó)產(chǎn)血清質(zhì)量很差,不利于細(xì)胞培養(yǎng)。對(duì)于細(xì)胞培養(yǎng)而言,胎牛血清(FetalBovineSerum,F(xiàn)BS)的重要性不言而喻。永康哺乳動(dòng)物懸浮和貼壁細(xì)胞的培養(yǎng)基
血清是細(xì)胞培養(yǎng)過程中常用的生物試劑,市面上有很多種類的血清,現(xiàn)在就來給大家介紹其中的一款——透析胎牛血清。透析胎牛血清是采用透析的方法,過濾去除10KDa以下的小分子(如氨基酸、核苷:次黃嘌呤和胸腺核苷等、膽固醇等),而保留血清中的大分子成分,因而可用于一些特定的細(xì)胞實(shí)驗(yàn),比如:需要避免細(xì)胞培養(yǎng)基中一些小分子干擾的實(shí)驗(yàn)。使用放射性標(biāo)記小分子,對(duì)生物合成過程進(jìn)行監(jiān)測(cè),以研究蛋白質(zhì)等大分子的生化性質(zhì)、合成、加工、細(xì)胞內(nèi)傳送、分泌和降解過程。這時(shí),常將細(xì)胞放在含有充足養(yǎng)分和放射性標(biāo)記氨基酸(如35S標(biāo)記的蛋氨酸或半胱氨酸)的培養(yǎng)液中進(jìn)行標(biāo)記。為避免外源未標(biāo)記的氨基酸的干擾,這時(shí)所用的血清就是透析胎牛血清,不含蛋氨酸和半胱氨酸,基礎(chǔ)培養(yǎng)基也要求不含蛋氨酸和半胱氨酸。南通RPMI 1640 Medium胎牛血清:母牛懷孕3-8個(gè)月時(shí),采用剖腹心臟密閉穿刺取血。
什么是優(yōu)良的胎牛血清?微生物,包括細(xì)菌、霉菌、支原體、噬菌體、各類病原性的病毒等。隨著國(guó)內(nèi)血清廠家生產(chǎn)條件的改善提高,細(xì)菌、霉菌等“大型”微生物幾乎能100%控制,支原體經(jīng)過0.1μm過濾,大多也能清理。大腸桿菌噬菌體的污染還是比較嚴(yán)重的,主要是生產(chǎn)環(huán)境過程中帶入,又無法過濾,很難徹底清理,但對(duì)血清質(zhì)量影響不大。病原性的病毒,特別是BVDV,在國(guó)產(chǎn)血清中幾乎90%以上都存在,這類微生物是影響國(guó)產(chǎn)血清質(zhì)量的重要因素之一,而進(jìn)口胎牛血清相對(duì)國(guó)產(chǎn)血清而言,檢出率不高。
胎牛血清應(yīng)該怎么選?血源可追溯性:選擇來源安全、可追溯的FBS對(duì)于細(xì)胞培養(yǎng)來說至關(guān)重要。目前市面上存在較多以假亂真的FBS產(chǎn)品,科研工作者對(duì)血清的真實(shí)產(chǎn)地、來源難以鑒別。對(duì)此,國(guó)際血清行業(yè)協(xié)會(huì)(ISIA)實(shí)施了供應(yīng)鏈可追溯性的行業(yè)標(biāo)準(zhǔn),以確保FBS的質(zhì)量和安全性。例如,F(xiàn)BS供應(yīng)商是否保留原產(chǎn)地的可追溯記錄?是否持有血清生產(chǎn)各階段處理、運(yùn)輸和商業(yè)交易的文件?這些都是判斷FBS可追溯性需要考慮的因素。產(chǎn)品檢測(cè),每款FBS在生產(chǎn)上市之前,必須經(jīng)過嚴(yán)格的質(zhì)控檢測(cè)。質(zhì)控環(huán)節(jié)必不可少,以確保上市的血清符合規(guī)定合乎規(guī)格,而血清產(chǎn)品分析證書(COA)就是FBS質(zhì)控的重要體現(xiàn)。在COA中,常規(guī)的檢測(cè)指標(biāo)包括內(nèi)有害元素、總蛋白、細(xì)菌、病毒等,例如我國(guó)藥典規(guī)定,F(xiàn)BS中內(nèi)有害元素含量應(yīng)≤10EU/mL,另外總蛋白為30-50mg/mL、血紅蛋白檢測(cè)不高于30mg/dL。雖然胎牛血清與新生牛血清的成分并不存在很大的差別,可是諸如促細(xì)胞生長(zhǎng)因子和促貼附因子等組份并不相同。
胎牛血清應(yīng)該怎么選?穩(wěn)定性,F(xiàn)BS作為其他行業(yè)的副產(chǎn)品,其生產(chǎn)在本質(zhì)上會(huì)受到天氣、食物供應(yīng)、經(jīng)濟(jì)條件和牛群規(guī)模及病情等各種因素的影響,導(dǎo)致血清的供應(yīng)可能出現(xiàn)貨源、價(jià)格及批次間的不穩(wěn)定性,從而造成實(shí)驗(yàn)的不順甚至實(shí)驗(yàn)失敗。在過去,國(guó)內(nèi)外已有多個(gè)實(shí)驗(yàn)室出現(xiàn)過因血清批間差異大而導(dǎo)致實(shí)驗(yàn)結(jié)果無法重復(fù)的情況,浪費(fèi)了巨大的時(shí)間和金錢成本。因此,找到穩(wěn)定提供同批次FBS的供應(yīng)商,對(duì)于確保自己細(xì)胞實(shí)驗(yàn)結(jié)果的真實(shí)性和可重復(fù)性具有重要意義,而且花在重復(fù)實(shí)驗(yàn)或檢驗(yàn)新批次上的時(shí)間將很大減少。胎牛血清是細(xì)胞培養(yǎng)中用量更大的天然培養(yǎng)基,含有豐富的細(xì)胞生長(zhǎng)必須的營(yíng)養(yǎng)成份。徐州食蟹猴血清
由于胎牛血清與新生牛血清存在細(xì)微差異,因此它們的用途與用法也不盡相同。永康哺乳動(dòng)物懸浮和貼壁細(xì)胞的培養(yǎng)基
實(shí)驗(yàn)室胎牛血清使用問題匯總:1、血清的保存方法。建議血清應(yīng)保存在-5℃至-20℃。假如存放于4℃,請(qǐng)勿超過個(gè)月。若血清瓶次無法用完,建議無菌分裝至恰當(dāng)?shù)臏缇萜鲀?nèi),再放回冷凍,避免反復(fù)凍融。2、在培養(yǎng)基中添加了血清和維生素后,是否可以長(zhǎng)期保存?因?yàn)樾┚S生素和血清中的基本成分在解凍后就開始降解,所以新鮮培養(yǎng)基中添加了血清和維生素后,應(yīng)該在兩到三周內(nèi)使用完畢。3、如何解凍血清才不會(huì)使產(chǎn)品質(zhì)量受損?血清從冷凍箱取出后,先置于2~8℃冰箱融解,然后在室溫下全融。解凍血清時(shí),必須在融解過程中規(guī)則地?fù)u晃均勻,使溫度及成分均,減少沉淀的發(fā)生。推薦在-20℃以下儲(chǔ)存血清,并避免反復(fù)凍融。因?yàn)殚L(zhǎng)時(shí)間儲(chǔ)存在2-8℃時(shí),血清中的各種蛋白和脂蛋白(如冷凝集素、纖維蛋白原、玻粘連蛋白等)可能聚集而形成沉淀或可見的混濁。永康哺乳動(dòng)物懸浮和貼壁細(xì)胞的培養(yǎng)基
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