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胎牛血清與新生牛血清的區(qū)別:組份與比例不同,雖然胎牛血清與新生牛血清的成分并不存在很大的差別,可是諸如促細胞生長因子和促貼附因子等組份并不相同,而且兩者之間的元素以及其他活性物質(zhì)的比例也不同。胎牛血里的生長因子適合牛體內(nèi)各種細胞生長,通常在8個月胎齡后慢慢消失。另外,胎牛血清的免疫球蛋白含量要遠遠低于新生牛血清,胎牛的血清相對來說比較純,所以培養(yǎng)細胞的效果會更佳。用途與用法不同,由于胎牛血清與新生牛血清存在細微差異,因此它們的用途與用法也不盡相同。胎牛血清天然含有粘附蛋白等細胞外基質(zhì)成分,促進細胞的附著、鋪展。常州RPMI 1640 Medium
胎牛血清使用中的常見問題:血清中包含絮狀沉淀,它們是什么,怎么處理?沉淀包含纖維蛋白和脂蛋白。這是正常特性,不會影響產(chǎn)品性質(zhì)。要除去沉淀,離心血清(400g,1-2分鐘)或者簡單的讓其沉淀在瓶子底部,將血清小心的轉(zhuǎn)移到另一個無菌瓶里(一般不建議采用過濾的方法除去沉淀,因為沉淀會堵塞濾膜而無法過濾)。大多情況輕輕搖動沉淀并加熱至37℃就會再溶解。所以,使用產(chǎn)品時要搖動并加熱血清至37℃,沉淀會自然消失。實驗室如何選擇適合的血清?國內(nèi)一致認為HYCLONE的血清是更好的,但是根據(jù)我在北美的經(jīng)歷,國外一般認為GIBCO比HYCLONE好,所以并不是價格決定質(zhì)量,但是總的來說這兩種價格普遍偏貴,一般不是太嬌氣的細胞,國產(chǎn)的就夠用了。此外,由于國內(nèi)HYCLONE,GIBCO并沒有生產(chǎn)線,我們只能從代理商那里買,而代理商又魚龍混雜,所以買到假貨的可能性也很大。臺州DMEM 培養(yǎng)基(高糖,無酚紅)胎牛血清起酸堿度緩沖液作用。
細胞和組織培養(yǎng)為什么需要使用血清?血清通常作為補充劑,以2-10%的濃度加入培養(yǎng)基中,為細胞提供綜合營養(yǎng)、元素、生長和附著因子。血清還可作為細胞培養(yǎng)系統(tǒng)的緩沖液,避免各種因素(包括pH變化、蛋白水解活性或重金屬、內(nèi)毒等)干擾細胞生長或產(chǎn)生毒性作用。血清是如何加工的?血清采集后冷凍運輸至加工工廠,解凍并檢測細菌、病毒、內(nèi)有害元素和血紅蛋白含量等多項指標(biāo)。選擇更優(yōu)良的血清在無菌環(huán)境下進行系列膜過濾無菌處理,然后在無菌環(huán)境下進行分裝并快速凍存于-20°C,在所有批次驗證達到或找過QC標(biāo)準(zhǔn)之前隔離存放。
胎牛血清是由血漿去除纖維蛋白而形成的一種很復(fù)雜的混合物,其組成成份雖大部分已知,但還有一部分尚不清楚,且血清組成及含量常隨供血動物的性別、年齡、生理條件和營養(yǎng)條件不同而異。血清中含有各種血漿蛋白、多肽、脂肪、碳水化合物、生長因子、元素、無機物等,這些物質(zhì)對促進細胞生長或抑制生長活性是達到生理平衡的。功能:牛血清是細胞培養(yǎng)中用量更大的天然培養(yǎng)基,含有豐富的細胞生長必須的營養(yǎng)成份,常用于動物細胞的體外培養(yǎng),具有極為重要的功能。1.提供對維持細胞指數(shù)生長的元素,基礎(chǔ)培養(yǎng)基中沒有或量很少的營養(yǎng)物,以及主要的低分子營養(yǎng)物。2.提供結(jié)合蛋白,能識別維生素、脂類、金屬和其他元素等,能結(jié)合或調(diào)變它們所結(jié)合的物質(zhì)活力。3.有些情況下結(jié)合蛋白質(zhì)能與有毒金屬和熱原質(zhì)結(jié)合,起到消毒作用。4.是細胞貼壁、鋪展在塑料培養(yǎng)基質(zhì)上所需因子來源。5.起酸堿度緩沖液作用。6.提供蛋白酶抑制劑,使在細胞傳代時使剩余胰蛋白酶失活,保護細胞不受傷害。胎牛血清提供蛋白酶抑制劑,使在細胞傳代時使剩余胰蛋白酶失活,保護細胞不受傷害。
為什么使用胎兒血清而不是新生兒血清或成人血清?胎兒血清含有較多的生長因子,丙種球蛋白(即抗體)含量較低,非胎兒血清也有。這些很重要,因為生長因子促進細胞存活和增殖,而抗體可以與培養(yǎng)的細胞結(jié)合。此外,與成人或新生兒相比,胎兒血清中的補體蛋白(補體)含量較低。這些補體具有溶解培養(yǎng)細胞和干擾免疫測定的不良作用。血清和血漿均來自全血,通過離心去除包括紅細胞在內(nèi)的成分。血漿和血清之間的區(qū)別在于,凝血蛋白存在于血漿中,但已從血清中去除。血漿一般是通過在離心前向血液中加入抗凝劑來制備的,但不會去除凝血蛋白。通過在離心前使血液凝固或通過普遍/漸進離心來制備血清。因此,與凝血相關(guān)的纖維蛋白原和蛋白質(zhì)不存在于血清中。胎牛血清中含有各種血漿蛋白、多肽、脂肪、碳水化合物、生長因子、元素、無機物等。常州RPMI 1640 Medium
無合格質(zhì)檢的胎牛血清存在支原體、病毒等污染,這對細胞培養(yǎng)的實驗結(jié)果會造成嚴重不良影響。常州RPMI 1640 Medium
血清是由血漿去除纖維蛋白而形成的一種很復(fù)雜的混合物,其組成成分雖大部分已知,但還有一部分尚不清楚,且血清組成及含量常隨供血動物的性別、年齡、生理條件和營養(yǎng)條件不同而異。血清中含有各種血漿蛋白、多肽、脂肪、碳水化合物、生長因子、元素、無機物等,這些物質(zhì)對促進細胞生長或抑制生長活性是達到生理平衡的。牛血清是細胞培養(yǎng)中用量更大的天然培養(yǎng)基,含有豐富的細胞生長必須的營養(yǎng)成分,常用于動物細胞的體外培養(yǎng),具有極為重要的功能。1.提供對維持細胞指數(shù)生長的元素,基礎(chǔ)培養(yǎng)基中沒有或量很少的營養(yǎng)物,以及主要的低分子營養(yǎng)物。2.提供結(jié)合蛋白,能識別維生素、脂類、金屬和其他元素等,能結(jié)合或調(diào)變它們所結(jié)合的物質(zhì)活力。3.有些情況下結(jié)合蛋白質(zhì)能與有毒金屬和熱原質(zhì)結(jié)合,起到消毒作用。4.是細胞貼壁、鋪展在塑料培養(yǎng)基質(zhì)上所需因子來源。常州RPMI 1640 Medium
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