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用qPCR法進行支原體檢測時，出現(xiàn)擴增曲線異常的可能原因是什么？①軟件參數(shù)設置不當可能引起標曲參數(shù)或檢測結果異常。如擴增曲線信號蕞早出現(xiàn)在14個循環(huán)左右，基線卻設置為3-15，導致儀器將14個循環(huán)出現(xiàn)的熒光信號默認為基線部分，出現(xiàn)結果異常。建議將Baselin...

在進行支原體檢測之前，對支原體DNA進行提取的目的是為了從樣品中純化和富集支原體的DNA，以便進行后續(xù)的檢測和分析。以下是進行支原體DNA提取的主要原因和目的：分離支原體DNA：樣品中可能存在多種細菌、***和病毒等其他生物體的DNA。通過提取支原體D...

美國藥典USP40〈1223〉對NAT法支原體檢測產品有關性能驗證的要求，包括專屬性、檢測限（LOD）、耐用性、重現(xiàn)性。其中對于定量限（LOD）的定義及驗證方法如下：一種備用微生物方法的檢測限(LOD)定義為在規(guī)定的實驗條件下，在規(guī)定體積的樣品中可以檢測但不一...

核酸提取的質量標準之紫外光譜法：即使是蕞小的樣品（1~2L）也可以用紫外光譜法進行測量。DNA、RNA和單個核苷酸和寡核苷酸在260納米處吸收紫外線。在1厘米的比色皿中，1.0的A260相當于50μg/mLDNA和40μg/mLRNA。A260/A280比率提...

qPCR法支原體檢測試劑盒的操作流程包括支原體DNA提取、qPCR試劑配制、qPCR加樣及上機檢測、結果分析四個環(huán)節(jié)。支原體DNA提取包含樣品前處理（離心分離上清等）、樣品裂解液消化、支原體DNA與磁珠結合、一次洗滌、二次洗滌、洗脫；qPCR試劑在配制時需先將...

在進行支原體檢測之前，對支原體DNA進行提取的目的是為了從樣品中純化和富集支原體的DNA，以便進行后續(xù)的檢測和分析。以下是進行支原體DNA提取的主要原因和目的：分離支原體DNA：樣品中可能存在多種細菌、***和病毒等其他生物體的DNA。通過提取支原體D...

支原體是實驗室中常見的污染細胞的原核生物，據(jù)統(tǒng)計約有15%-35%的細胞被支原體污染。支原體會改變宿主細胞的結構和功能等一系列特征，造成實驗結果不正確；干擾細胞代謝和生長，改變核酸合成，影響細胞抗原性，導致染色體改變，干擾病毒復制以及模仿病毒的作用。因此，每一...

qPCR法支原體檢測程序中，陰性對照（NCS）和空白對照（BLK）的區(qū)別：陰性對照（NCS）：為樣品稀釋液經核酸提取純化后所得，在提取純化前同待測樣品一樣需加入IC，NCS用于監(jiān)測提取環(huán)節(jié)是否存在紕漏，比如：操作問題、試劑性能異常、提取環(huán)節(jié)出現(xiàn)污染等情況；空白...

磁珠法核酸提取過程中的常見誤區(qū)--試劑使用的越多，提取效果越好裂解效果不好?多加點裂解液。洗滌效果不好?多加點洗滌液。這是很多客戶在使用試劑盒中的慣性思維。但是對于磁珠法而言，每增加一部分液體體積，就減少了更多的磁珠碰撞幾率，而降低磁珠碰撞幾率，會導致吸附率的...

核酸提取的質量標準之電泳法：核酸提取后得到的核酸應保持其完整性，不應出現(xiàn)斷裂或降解等，電泳可以很好地了解完整核酸的存在，現(xiàn)象因為它是根據(jù)分子大小來分離的。低分子產品表明是水解的核酸。在DNA中，存在大約10kbp的高分子部分是合適的材料的良好標志。變性后，純化...

關鍵因子及對核酸提取的影響在進行核酸提取或純化時，必須密切注意一些因素，如pH值、鹽濃度、溫度、緩沖體積和潛在的乙醇污染。這些因素中的每一個都會極大地影響下游實驗的得率、質量和成功率。1.非蕞適pH值或鹽濃度可改變核酸的電荷，導致核酸不能與離心柱結合，或導致苯...

常用的支原體檢測方法有傳統(tǒng)的分離培養(yǎng)法、指示細胞培養(yǎng)法（DNA染色法）、ELISA法、PCR法等。分離培養(yǎng)法基本不會出現(xiàn)假陰性結果，因此被譽為支原體檢測金標準。不過也存在四個弊端，一是檢測時間太長，支原體要長出明顯克隆至少需要4周時間；二是盡管可以檢測絕大多數(shù)...

核酸提取時，加標回收率的定義及注意事項：加標回收率是指在測定樣品的同時,于同一樣品的子樣中加入一定量的標準物質進行測定,將其測定結果扣除樣品的測定值,以計算回收率。加標回收設置的注意事項：①同一樣品的子樣取樣體積必須相等;②各類子樣的測定過程必須按相同的操作步...

核酸提取的質量標準之電泳法：核酸提取后得到的核酸應保持其完整性，不應出現(xiàn)斷裂或降解等，電泳可以很好地了解完整核酸的存在，現(xiàn)象因為它是根據(jù)分子大小來分離的。低分子產品表明是水解的核酸。在DNA中，存在大約10kbp的高分子部分是合適的材料的良好標志。變性后，純化...

南京正揚生物的宿主細胞殘留核酸提取試劑盒手工操作步驟：1.向離心管（自備）中加入100μL樣本，做好標記和記錄。2.加入25μL裂解液1，充分渦旋混勻25s后，瞬時離心。℃消化30min。4.待樣本消化完畢后，瞬時離心，待用。5.加入200μL裂解...

磁珠法核酸提取常見問題之磁珠殘留：導致磁珠殘留的可能原因：①磁珠原因：所使用的磁珠的粒徑過小、磁珠表面基團松散、磁珠的磁含量低；②自動化核酸提取設備原因：自動化核酸提取設備的磁分離方式設計有問題、設備的磁場弱；③操作原因：使用自動化設備進行核酸提取時所用的參數(shù)...

南京正揚生物科技有限公司自主研發(fā)生產的宿主細胞殘留核酸提取試劑盒（磁珠法）有哪些操作注意事項？①洗滌液A/洗滌液B在***次使用時需按照試劑瓶上的標識加入指定量的異丙醇；②磁珠懸浮液不可冷凍、高速離心、長時間離心，會導致磁珠與核酸的結合能力下降，導致回...

細胞培養(yǎng)時做支原體檢測是至關重要的。支原體在自然界分布普遍，無細胞壁，直徑為0.1-0.3μm，且形態(tài)易變，極易通過除菌過濾器。細胞培養(yǎng)被支原體污染是極普遍的問題，在細胞培養(yǎng)過程中如果在顯微鏡下發(fā)現(xiàn)破碎的細胞很多，需要頻繁換液才能維持傳代培養(yǎng)的時候，即應懷疑支...

南京正揚生物科技有限公司自主研發(fā)生產的支原體檢測試劑盒利用Taqman熒光探針原理，定性檢測樣品中是否有支原體污染。本試劑盒涵蓋100多種支原體DNA序列，檢測快速，專一性強，靈敏度高，性能可靠，且能提供國際第三方檢測機構出具的性能驗證報告，符合中、日、美國家...

我國藥典規(guī)定的支原體檢測方法為培養(yǎng)法和指示細胞染色法。但這些方法也存在一些不盡人意之處，如所需時間較長，有的操作復雜等?！吨袊幍?020年版3301支原體檢測法》中指出：除培養(yǎng)法和DNA染色法外，也可采用經國家藥品檢定機構認可的其他方法，對支原體進行檢測。由...

用qPCR法進行支原體檢測時，出現(xiàn)擴增曲線末尾起跳的原因可能是什么？①陰性質控或無模板對照曲線末尾出現(xiàn)起跳情況，考慮環(huán)境存在污染所致，建議對實驗環(huán)境做好控制，如使用低吸附帶濾芯搶頭和低吸附ep管，保證實驗分區(qū)（樣品處理區(qū)、試劑保存及配制區(qū)、PCR擴增區(qū)）、用D...

qPCR法支原體檢測程序中，陰性對照（NCS）和空白對照（BLK）的區(qū)別：陰性對照（NCS）：為樣品稀釋液經核酸提取純化后所得，在提取純化前同待測樣品一樣需加入IC，NCS用于監(jiān)測提取環(huán)節(jié)是否存在紕漏，比如：操作問題、試劑性能異常、提取環(huán)節(jié)出現(xiàn)污染等情況；空白...

磁珠法核酸提取常見問題之磁珠結塊：導致磁珠結塊的可能原因：①磁珠吸附了過多雜質，包括蛋白、脂質、多糖等；②磁珠粒徑太??；③洗滌完畢，乙醇干燥時間過長。④磁珠磁吸附時間過長；⑤操作中途含磁珠的樣品管離心速率過高、離心時間過長；磁珠結塊的解決辦法：①優(yōu)化裂解液、結...

隨著我國生物藥以及細胞***相關產業(yè)的發(fā)展，相關的法律法規(guī)也在不斷健全。支原體檢測就是其中必不可少的一項。準確進行支原體檢測，是避免外源因子污染，保證產品質量的重要質控手段。南京正揚生物科技有限公司的qPCR法支原體檢測試劑盒，檢測體系（包括提取和檢測...

rcAAV復制型腺相關病毒檢測過程中，qPCR反應體系配制環(huán)節(jié)有哪些注意事項？①qPCR的整個操作要低溫環(huán)境進行，防止模板的降解，試劑避免反復凍融。②配制反應體系前試劑要充分混勻，除了模板外的反應體系要統(tǒng)一配制，然后再分配至qPCR管中，配制的時候考慮到操作或...

磁珠法核酸提取常見問題之核酸純度差：提取純化所得核酸純度差的可能原因：①樣品裂解、消化不充分，提取純化液中所含的雜質較多；②微球分散性不好，導致洗滌環(huán)節(jié)無法將雜質充分洗棄；③微球吸附能力太強，不僅吸附核酸，還能吸附大量蛋白、脂質、多糖等雜質。提取純化所得核酸純...

磁珠法核酸提取產品，磁珠如何與核酸結合實現(xiàn)提取功能？在磁珠法的反應體系中，核酸分子（DNA&RNA）會由線性壓縮成球狀，暴露出核酸骨架上大量的負電基團與反應體系中的陽離子連接，在磁珠蕞外層負電基團的作用下，形成“陰離子-陽離子-陰離子”的鹽橋結構，使核酸分子被...

南京正揚生物科技有限公司自主研發(fā)生產的支原體檢測試劑盒在PCR試劑配制及加樣上機環(huán)節(jié)有哪些注意事項？①避免在不必要的情況下凍融試劑盒中的試劑，檢測試劑盒需避光儲存于-18℃以下；②本試劑盒所用的試劑不能隨意替換，以免影響檢測效果。不同批號的試劑盒各成分也不可相...

南京正揚生物自主研發(fā)生產的支原體檢測試劑盒(熒光探針法)是基于NAT(nucleicacidamplificationtechniques)的一種快速定性檢測生產原料、細胞庫、病毒種子、病毒或細胞收獲液、***用細胞中潛在支原體污染的產品。該試劑盒采用多...

南京正揚生物科技有限公司自主研發(fā)生產的支原體檢測試劑盒在PCR試劑配制及加樣上機環(huán)節(jié)有哪些注意事項？①實驗時應注意防止外源DNA對試劑的污染，先加樣品DNA，然后進行陽性質控品的操作。在制備反應試劑和添加DNA模板時，使用帶濾芯的搶頭，添加不同的試劑和不同的樣...