納米顆粒，由于其在DNA轉運到細胞中的保護能力，在不久的將來可以用作轉基因的非病毒載體。通過將納米粒子與許多不同的配體和化合物連接來修飾納米粒子，有助于改善它們在細胞內(nèi)的運輸。將納米顆粒靶向到細胞內(nèi)的特定位置，配子和胚胎，可以通過磁轉染來實現(xiàn)。盡管與市售的用于體外培養(yǎng)細胞的轉染試劑相比，使用納米顆粒轉染具有相當?shù)男屎透偷募毎拘?，但仍需要證明以這種方式傳遞DNA會導致體內(nèi)相似水平的基因表達，特別是考慮到該技術可能導致副作用。選擇合適的轉染試劑可能取決于幾個因素，包括轉染核酸的類型和轉染的復雜性(單轉染或共轉染)。廣西fugene轉染試劑

小RNA和質(zhì)粒DNA的共轉染可用于評估轉染效率。這可以通過引入含有熒光素酶報告基因的質(zhì)粒來實現(xiàn)，其中的3'UTR可以被特定的小RNA(如miRNA)識別，然后允許小RNA結合以抑制熒光素酶的表達。另一方面，在RNA干擾(RNAi)研究中，小RNA和質(zhì)粒DNA的共轉染也是必不可少的，以確定siRNA等特定小RNA對宿主細胞中特定基因表達的調(diào)節(jié)作用。小的非編碼RNA，如siRNA，以其表觀遺傳調(diào)控能力而聞名，更具體地說，是轉錄后對特定基因表達的調(diào)控。siRNA模擬物和攜帶與熒光素酶報告系統(tǒng)相關的特定基因的質(zhì)粒DNA可以同時共轉染到靶細胞中。siRNA模擬物成功敲低特定基因表達將導致熒光素酶活性***降低。共轉染還可能涉及不同的小分子如miRNAs，這有助于研究小RNA對靶宿主細胞的影響。例如，如果引入miRNA模擬物可以影響特定細胞類型中特定下游基因的表達，那么預計將其抑制劑序列同時轉染到同一細胞中會降低單獨miRNA模擬物序列發(fā)揮的轉錄后調(diào)節(jié)作用。與單一核酸類型的轉染相比，涉及將多個核酸轉移到同一細胞中的共轉染通常更多挑戰(zhàn)性更大，因為并非所有核酸類型都能有效轉移，這可能取決于轉染方法和所涉及的細胞類型。脾轉染試劑定做納米顆粒的主要特性使它們能夠用于細胞轉染。

攜帶要轉染的特定核酸的載體構建可以進一步分為病毒載體或質(zhì)粒載體。病毒和質(zhì)粒通過存在合適的真核啟動子促進外源轉基因的表達。病毒載體可能在宿主細胞中觸發(fā)免疫原性反應，而非病毒載體的免疫原性相對較低。需要一種傳遞機制來促進靶向核酸或載體結構轉移到宿主細胞中。其中一些需要物理方法，而另一些涉及使用遞送載體，可能是脂質(zhì)載體或非脂質(zhì)載體，以幫助增強載體載體復合物與宿主細胞膜之間的接觸，從而促進復合物進入細胞。設計和啟動轉染試驗可能具有挑戰(zhàn)性，特別是可供選擇的轉染方法或策略種類繁多的情況下。

肌內(nèi)注射脂質(zhì)體不能引起強烈的毒性反應，這與肺內(nèi)或靜脈注射途徑的情況不同。幾項體內(nèi)研究表明，pDNA載體的肺內(nèi)遞送是促炎th1樣細胞因子的產(chǎn)生和隨后浸潤細胞涌入肺區(qū)域的原因。在任何情況下，陽離子脂質(zhì)本身不會引起免疫反應，而且這種效果不是由于pDNA制備中存在內(nèi)***。在一項囊性纖維化臨床試驗中，急性輕度流感樣癥狀被認為是由DNA依賴效應引起的，而對照組(*脂質(zhì)組)沒有觀察到這種效應。有幾種方法可以降低載體CpG基序的免疫刺激作用。這些包括這些基序中胞嘧啶堿基的甲基化，中和序列的添加，CpG基序的消除，使用化學或生物方法的免疫抑制，將載體靶向遠離網(wǎng)狀內(nèi)皮系統(tǒng)的細胞，以及抑制內(nèi)粒體酸化。研究表明，系統(tǒng)地消除pDNA載體中約50%的CpG基序，可導致體外小鼠脾細胞和靜脈注射或鼻內(nèi)滴注小鼠肺中細胞因子分泌減少。該方案還增加了轉基因表達水平。利用肌內(nèi)注射等途徑，遠離網(wǎng)狀上皮系統(tǒng)進行被動靶向，也能提高轉基因表達水平。在轉染中，DNA通常通過病毒或非病毒載體(如質(zhì)粒)轉運到宿主細胞中。

Severinoetal.進行的研究也指出了陽離子脂質(zhì)作為基因遞送納米載體的潛在毒性。他們成功實現(xiàn)了人動力蛋白的表達，但也證明了較高濃度的SLN仍然具有細胞毒性，并導致活細胞數(shù)量減少。另一組比較了DNA/DOTAP復合物和由魚精蛋白、DNA和脂質(zhì)層組成的納米顆粒在不同細胞系上的轉染效率:CHO(中國倉鼠卵巢細胞)、HEK293(人胚胎腎細胞)、NIH3T3(小鼠胚胎成纖維細胞)和A17(小鼠*細胞)。魚精蛋白/DNA/脂質(zhì)納米顆粒在每種細胞系中更有效地實現(xiàn)綠色和紅色熒光蛋白的表達，即使不同細胞系對轉染的敏感性不同。陽離子脂質(zhì)的毒性作用使我們必須尋找另一種能夠取代它們的化合物。不同的β-氨基酯聚合物作為納米載體，成功地將hESC(人類胚胎干細胞)的轉染效率提高了四倍，同時保持較低的細胞毒性。這給我們帶來了希望，納米顆粒能夠與具有所需官能團的其他化合物的必要添加一起形成***有效的核酸遞送平臺。在轉染實驗中使用對照對于確定所使用的轉染試劑和核酸的效果和效率至關重要。福建高分子轉染試劑

在選擇合適的小RNA分子進行轉染相關功能分析之前，應先確定其實驗需要。廣西fugene轉染試劑

脂質(zhì)復合物(CLNACs)通過網(wǎng)格蛋白參與的內(nèi)吞作用進入細胞，并被困在核內(nèi)小體中，從這些囊泡結構中釋放出來，進入核周區(qū)域，***進入細胞核。內(nèi)吞作用在一定程度上取決于脂質(zhì)體載體的物理化學性質(zhì)。Friend和同事描述了可能由脂質(zhì)體與核膜融合而形成的囊泡和網(wǎng)狀核內(nèi)膜。**近有研究表明，很大一部分從核內(nèi)體釋放到細胞質(zhì)質(zhì)的質(zhì)粒由于與細胞質(zhì)中的大離子凝聚劑結合而失去活性。這可能解釋了脂質(zhì)轉染所觀察到的低且可變的轉染率。雖然這些脂質(zhì)載體從細胞外部到細胞核的路徑尚未完全確定，但核酸能夠產(chǎn)生其效果本身就是一項驚人的壯舉。至少對于質(zhì)粒而言，較小的結構體比較大的質(zhì)粒具有更高的轉染率。核酸外排，雖然不是常見的報道，但也被證明會發(fā)生。廣西fugene轉染試劑