此外,病毒濃度被認為是影響轉(zhuǎn)導效率的另一個因素。在Haas等人的評估中測試的其他幾個參數(shù)中,即含有不同輔助蛋白的HIV慢病毒載體構建,纖維連接蛋白片段的存在/不存在以及在人臍帶血和胚胎腎細胞的轉(zhuǎn)導培養(yǎng)基中添加多陽離子硫酸魚精蛋白,只有病毒滴度似乎與病毒轉(zhuǎn)導效率直接相關。轉(zhuǎn)染介質(zhì)的條件也可能影響轉(zhuǎn)導效率。例如,在轉(zhuǎn)導過程中,使用胎牛血清比牛血清產(chǎn)生更好的轉(zhuǎn)導效率。同樣,研究表明,deae-葡聚糖等多陽離子可以比較大限度地減少帶負電荷細胞之間的排斥力,并促進病毒轉(zhuǎn)導。影響化學轉(zhuǎn)染效率的因素在選擇合適的小RNA分子進行轉(zhuǎn)染相關功能分析之前,應先確定其實驗需要。廣東轉(zhuǎn)染試劑便宜
基因注射包括通過注射將所需的核酸物質(zhì)直接輸送到宿主細胞核中。當細胞轉(zhuǎn)染具有挑戰(zhàn)性時,特別是當需要對宿主細胞進行遺傳修飾時,這種方法是一種很好的替代方法。與其他非病毒基因傳遞方法一樣,沒有一種方法可以適用于所有不同的細胞類型,選擇合適的細胞類型和核酸大小對于確保基因注射的成功至關重要。例如,先前的一項研究報道了成功生成表達cre重組酶(大小~1,000bp)的轉(zhuǎn)基因小鼠細胞系。另一方面,在一項體內(nèi)研究中,表達轉(zhuǎn)基因的小鼠肌纖維數(shù)量與注射次數(shù)和給藥質(zhì)粒劑量相關。另一項體外研究進一步支持了這一觀點,該研究報道了表達報告基因的宿主細胞的數(shù)量與注入細胞的核酸量密切相關。此外,微針的大小、形狀和額外涂層的存在也會影響基因注射的效率,因為有報道稱,涂有微顆粒的小尺寸微針(<10毫米)能夠順利地將所需的貨物輸送到皮膚的角質(zhì)層。江蘇轉(zhuǎn)染試劑難轉(zhuǎn)染基因是陽離子聚合物作為轉(zhuǎn)染劑的主要應用。
脂質(zhì)復合物又稱陽離子脂質(zhì)-核酸復合物(CLNACs),是由非離子核酸與陽離子脂質(zhì)體(CLs)表面結合,**終形成多層脂質(zhì)-核酸復合物而形成的。帶負電荷的核酸被吸引到帶正電荷的囊泡表面,**初與??吭陉栯x子囊泡表面的核酸分子形成復合物,然后發(fā)展到核酸分子持續(xù)粘在脂質(zhì)分子上的階段,脂質(zhì)雙分子層圍繞緊實的核脂質(zhì)顆粒。復合物形態(tài)的這種異質(zhì)性可能歸因于囊泡的脂質(zhì)組成、復合物形成的方式、脂質(zhì):核酸比例、核酸結構的大小、試劑的批次差異以及用于處理和可視化這些復合物的技術。除了靜電吸引外,疏水相互作用被認為有助于脂質(zhì)和核酸之間的復合物形成。因此,根據(jù)正電荷(陽離子脂質(zhì))與負電荷(核酸上的磷酸基)的電荷比,脂質(zhì)體可能通過與細胞表面的蛋白聚糖基團等帶電殘基的靜電相互作用,或通過與質(zhì)膜疏水區(qū)域的疏水相互作用進入細胞。
陽離子聚合物是一種非病毒載體,其結構的一個共同特征是分子中存在許多帶正電的基團,這些基團被質(zhì)子化成帶正電的聚合物。陽離子聚合物可以通過靜電相互作用結合核酸,并將其凝聚成小的納米顆粒。正電荷改善了與帶負電荷的細胞膜的相互作用,并幫助多聚體在溶酶體降解發(fā)生之前逃離核內(nèi)體。隨后,多聚體通過陽離子聚合物上帶正電基團介導的質(zhì)子海綿效應從核內(nèi)體中逸出。此外,核酸必須與陽離子聚合物分離,才能**終發(fā)揮其功能。成功的核酸轉(zhuǎn)染需要轉(zhuǎn)染效率高、細胞毒性低。在確定陽離子聚合物是否是合適的核酸轉(zhuǎn)染試劑時,必須考慮這兩個特點。一般認為,陽離子聚合物的分子量越高,其包封核酸和被細胞攝取的能力越強,細胞活力和核酸釋放越差。另一方面,分子量越低的聚合物,其濃縮核酸和被細胞攝取的能力就越低,但在細胞毒性和核酸釋放方面則表現(xiàn)得更好。因此,轉(zhuǎn)染時應慎重考慮陽離子聚合物的分子量。一些化學修飾,如聚乙二醇化和膽固醇修飾,可以***改善聚合物的性能。此外,可生物降解材料是降低細胞毒性的有效手段。化學轉(zhuǎn)染的效率可能取決于幾個因素,如使用的試劑類型、靶細胞的來源和性質(zhì),以及選擇的DNA與試劑比例。
化學轉(zhuǎn)染的效率在很大程度上取決于幾個因素,如使用的試劑類型、靶細胞的來源和性質(zhì),以及選擇的比較好DNA與試劑比例。慢病毒等病毒載體能夠攜帶大尺寸的核酸,并將其靶標傳遞給非分裂細胞和分裂細胞,因此在基因***中非常有用。有幾個因素已被證明可能影響病毒轉(zhuǎn)導的效率,如靶細胞類型、使用的啟動子類型、載體濃度和使用的轉(zhuǎn)導介質(zhì)條件。在一項評估使用人類免疫缺陷病毒(HIV)和馬傳染性貧血病毒(EIAV)進行基因轉(zhuǎn)導的體外研究中,觀察到這兩種病毒在來自人類、倉鼠、貓、狗、馬和豬的不同細胞系上的不同程度的效率。在大多數(shù)細胞類型上,使用HIV的轉(zhuǎn)導效率普遍優(yōu)于EIAV,而這兩種病毒對嚙齒動物細胞的***性較弱。在同一項研究中,啟動子的類型也被認為是可能影響轉(zhuǎn)導效率的一個因素,因此含有替代CMV啟動子的內(nèi)部啟動子EF-1a的HIV在小鼠和大鼠細胞上表現(xiàn)出更高的轉(zhuǎn)導效率。在轉(zhuǎn)染中,DNA通常通過病毒或非病毒載體(如質(zhì)粒)轉(zhuǎn)運到宿主細胞中。廣東轉(zhuǎn)染試劑便宜
核酸與轉(zhuǎn)染試劑的比例對轉(zhuǎn)染效率也有影響。廣東轉(zhuǎn)染試劑便宜
共轉(zhuǎn)染是將一種以上類型的核酸引入真核細胞的過程。組合的一些例子包括多個質(zhì)粒DNA ,siRNA和質(zhì)粒DNA ,以及多個miRNAs進入同一個細胞。通常,多質(zhì)粒DNA共轉(zhuǎn)染的目的是將一種以上的外源基因?qū)胨拗骷毎?。其應用之一是生產(chǎn)由幾種質(zhì)粒DNA成分組成的合成病毒或雜交載體。一個例子是在HEK293細胞系中,用轉(zhuǎn)移、包膜和包裝載體等幾種質(zhì)粒載體生成慢病毒。此外,多個質(zhì)粒DNA的共轉(zhuǎn)染也可以應用于蛋白質(zhì)-蛋白質(zhì)相互作用(PPI)研究,以研究一種蛋白質(zhì)與另一種蛋白質(zhì)之間的關系。廣東轉(zhuǎn)染試劑便宜