翻譯后修飾蛋白組分析:蛋白質(zhì)翻譯后修飾是影響蛋白質(zhì)功能并調(diào)節(jié)整個細胞過程的重要方式,幾乎在每個細胞過程中都是不可或缺的。分析和鑒定翻譯后修飾蛋白質(zhì)對揭示蛋白質(zhì)的功能和深入了解各種生理現(xiàn)象具有重要意義。大多數(shù)翻譯后修飾蛋白以低化學計量和豐度存在,這限制了在分析全細胞裂解液時對其的檢測。因此,要在蛋白質(zhì)組學的范圍內(nèi)表征翻譯后修飾蛋白,純化方法是必要的,以分離修飾蛋白和肽段,然后再進行后續(xù)分析。后續(xù)分析一般采用質(zhì)譜技術(shù)進行,可以對翻譯后修飾蛋白組進行定性和定量研究。蛋白質(zhì)翻譯后修飾的作用主要是改變蛋白質(zhì)的活性。山東蛋白質(zhì)丙二?;揎椊M學質(zhì)譜鑒定
蛋白質(zhì)翻譯后修飾組學:蛋白質(zhì)翻譯后修飾(Post-translational modification, PTM)是指對翻譯后的蛋白質(zhì)進行共價加工的過程。它通過在一個或多個氨基酸殘基加上修飾基團,可以改變蛋白質(zhì)的物理、化學性質(zhì),進而影響蛋白質(zhì)的空間構(gòu)象和活性狀態(tài)、亞細胞定位、折疊及其穩(wěn)定性以及蛋白質(zhì)-蛋白質(zhì)相互作用。蛋白質(zhì)翻譯后修飾的豐度變化在生命活動研究中具有重大意義,異常的翻譯后修飾會導致多種疾病的發(fā)生。質(zhì)譜可以分辨蛋白質(zhì)修飾前和修飾后分子量上的變化,因此只要知道靶蛋白翻譯后修飾前后分子量的變化,就能對翻譯后修飾方式進行鑒定和定量。廣州蛋白質(zhì)亞硝基化修飾組學有哪些質(zhì)譜是蛋白質(zhì)翻譯后修飾檢測的常用技術(shù)之一。
翻譯后修飾蛋白的檢測方法:翻譯后修飾蛋白的檢測技術(shù)包括有免疫沉淀、western blot、質(zhì)譜技術(shù)、體外生化分析等。其中,免疫沉淀是大多數(shù)翻譯后修飾檢測中的關(guān)鍵步驟,它利用蛋白特異性抗體或某種翻譯后修飾的特異性抗體來富集目標蛋白,之后再用western blot或質(zhì)譜技術(shù)分析目標蛋白。Western blot和質(zhì)譜技術(shù)均可用于蛋白質(zhì)翻譯后修飾的下游檢測,其中Western blot相對簡單但依賴于特異性抗體且無法識別單個蛋白質(zhì)變化,質(zhì)譜則可以檢測包括未知PTM在內(nèi)的幾乎所有的PTMs但成本更高需要專業(yè)知識來分析產(chǎn)生的大量數(shù)據(jù)。研究人員可以根據(jù)成本、有無可用抗體,以及有沒有目標等選擇合適的方法進行檢測。
乙酰化修飾蛋白質(zhì)組學分析:乙?;揎椀鞍踪|(zhì)組學分析是指從蛋白質(zhì)組學的水平分析蛋白質(zhì)乙?;揎棧ㄒ阴;鞍踪|(zhì)的鑒定和定量。提供基于質(zhì)譜的乙酰化蛋白組研究服務(wù)。蛋白質(zhì)乙?;ńM蛋白乙酰化和非組蛋白乙?;=M蛋白乙?;饕琴嚢彼嵋阴;?,已在基因轉(zhuǎn)錄調(diào)控作用方面被普遍的研究。非組蛋白乙?;瘶?gòu)成了哺乳動物細胞中乙酰化蛋白的主要部分,參與了所有主要生物過程,包括蛋白質(zhì)的定位、轉(zhuǎn)移、功能和降解,遺傳物質(zhì)的轉(zhuǎn)錄和復制等。除了重要的生物學功能以外,乙酰化蛋白質(zhì)及其調(diào)控酶還與衰老和多種疾?。ㄈ缟窠?jīng)變形紊亂、心血管疾病等)緊密相關(guān)。因此,對乙酰化修飾蛋白質(zhì)組進行研究有助于進一步探索細胞的生命活動與了解相關(guān)疾病的發(fā)病機制。蛋白磷酸化修飾過程是通過蛋白激酶催化,將磷酸基團從ATP轉(zhuǎn)移到多肽底物的絲氨酸、或酪氨酸殘基上。
什么是蛋白質(zhì)的翻譯后修飾?蛋白質(zhì)的翻譯后修飾()是指蛋白質(zhì)在翻譯后的化學修飾。對于大部分的蛋白質(zhì)來說,這是蛋白質(zhì)生物合成的較后步驟。PTM是細胞信號傳導中的重要組成部分。通過向修飾基團添加一個或多個氨基酸殘基或通過蛋白質(zhì)水解切割該基團來改變蛋白質(zhì)的性質(zhì),是蛋白質(zhì)生物學功能表達的重要步驟。生物蛋白質(zhì)的翻譯后修飾極大地增加了蛋白質(zhì)結(jié)構(gòu)的類型和功能。這個過程調(diào)節(jié)細胞周期和蛋白質(zhì)轉(zhuǎn)錄,并影響表觀遺傳學。蛋白質(zhì)磷酸化修飾的免疫印跡技術(shù)優(yōu)點:能夠特異鑒定單個磷酸化位點。廣東蛋白質(zhì)琥珀?;揎椊M學主要技術(shù)
泛素化修飾是一種重要的翻譯后修飾。山東蛋白質(zhì)丙二?;揎椊M學質(zhì)譜鑒定
蛋白質(zhì)學組翻譯后修飾的類型:翻譯后修飾的類型包括N端fMet或Met的去除、二硫鍵的形成、化學修飾和肽鍵的裂解,其中磷酸化是比較常見的。蛋白質(zhì)的化學修飾反應(yīng)是在維持蛋白質(zhì)的完整性和功能性的基礎(chǔ)上,通過基于其氨基酸殘基的化學反應(yīng)獲得新的生物結(jié)合物。翻譯后修飾在哪里發(fā)生?翻譯后修飾主要發(fā)生在氨基酸側(cè)鏈或蛋白質(zhì)的C端或N端?,F(xiàn)有的官能團或新官能團的引入可被用于修飾蛋白質(zhì),以擴展20個標準氨基酸的化學組成。翻譯后修飾的位點通常帶有可以在化學反應(yīng)中充當親核試劑的官能團,如絲氨酸、蘇氨酸和酪氨酸的羥基;賴氨酸、精氨酸和組氨酸胺形式;同時,在蛋白質(zhì)的N端和C端,天冬酰胺也可作為翻譯后修飾中的一種聚糖連接點。翻譯后修飾也發(fā)生在氧化的蛋氨酸和側(cè)鏈位點的一些亞甲基上。山東蛋白質(zhì)丙二?;揎椊M學質(zhì)譜鑒定
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