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湖北定量蛋白組學(xué)質(zhì)譜分析

來源: 發(fā)布時(shí)間:2022-01-17

定量蛋白質(zhì)組學(xué)分析(QuantitativeProteomics)是對(duì)一個(gè)基因組表達(dá)的全部蛋白質(zhì)或一個(gè)復(fù)雜混合體系內(nèi)所有蛋白質(zhì)進(jìn)行精確鑒定和定量。可用于篩選和尋找任何因素引起的樣本之間的差異表達(dá)蛋白,結(jié)合生物信息學(xué)揭示細(xì)胞生理病理等功能,同時(shí)也可對(duì)某些關(guān)鍵蛋白進(jìn)行定性和定量分析。目前定量蛋白質(zhì)組學(xué)技術(shù)常見標(biāo)記(Label)和非標(biāo)記的(LabelFree)定量策略。定量蛋白質(zhì)組學(xué)技術(shù)常見的幾類主要包括:LabelFree定量蛋白組分析、SILAC與免疫共沉淀蛋白互作分析、MRM/PRM定量蛋白組學(xué)分析、SILAC/Dimethyl標(biāo)記定量蛋白組分析、SWATH定量蛋白組學(xué)、TMT/iTRAQ/multinotch定量蛋白組學(xué)分析。蛋白質(zhì)組學(xué)由此獲得蛋白質(zhì)水平上的關(guān)于疾病發(fā)生,細(xì)胞代謝等過程的整體而全方面的認(rèn)識(shí)。湖北定量蛋白組學(xué)質(zhì)譜分析

我們究竟怎么研究蛋白質(zhì)組學(xué)呢?抗體免疫的方法呢,其實(shí)就是ELISA,Western及蛋白質(zhì)芯片。通過合成大量蛋白質(zhì)特異的抗體,能夠進(jìn)行定性檢測及相對(duì)定量分析,只要你有好用的抗體,那么就可以通過免疫反應(yīng)讓抗體快速的識(shí)別你感興趣的蛋白質(zhì),然后用例如HRP發(fā)光等標(biāo)記方法顯示它們是否存在于你的樣品當(dāng)中?,F(xiàn)在已有的抗體不只能識(shí)別特定蛋白質(zhì),還能識(shí)別特定修飾的特定蛋白質(zhì)或者被特定修飾過的特定蛋白質(zhì)Motif。蛋白質(zhì)組與基因組相對(duì)應(yīng),也是一個(gè)整體的概念。廣東外泌體蛋白質(zhì)組學(xué)近兩年來蛋白質(zhì)組研究技術(shù)已被應(yīng)用到各種生命科學(xué)領(lǐng)域,如細(xì)胞生物學(xué)、神經(jīng)生物學(xué)等。

PRM靶向蛋白質(zhì)組學(xué):是一種基于Orbitrap為表示的高分辨、高精度質(zhì)譜的離子監(jiān)視技術(shù),首先利用四級(jí)桿質(zhì)量分析器的選擇能力,用Q1選擇目標(biāo)肽段的母離子,隨后在collisioncell中對(duì)母離子進(jìn)行碎裂,然后利用Orbitrap分析器在二級(jí)質(zhì)譜中檢測所選擇的母離子窗口內(nèi)的所有碎片信息。這樣能夠?qū)δ繕?biāo)蛋白質(zhì)、目標(biāo)肽段(如發(fā)生翻譯后修飾的肽段)進(jìn)行選擇性檢測,即可對(duì)目標(biāo)蛋白質(zhì)/肽段進(jìn)行相對(duì)(一定)定量。從而實(shí)現(xiàn)對(duì)復(fù)雜樣本中的目標(biāo)蛋白質(zhì)/肽段進(jìn)行準(zhǔn)確地特異性分析。

PRM靶向定量蛋白質(zhì)組學(xué)分析流程是怎樣的?要做PRM首先要明確目標(biāo)蛋白(或多肽)是什么,設(shè)計(jì)和建立針對(duì)這些目標(biāo)蛋白PRM質(zhì)譜采集方法,然后對(duì)待測樣品進(jìn)行PRM數(shù)據(jù)采集,將得到的原始譜圖數(shù)據(jù)導(dǎo)入分析軟件提取子離子信息進(jìn)行定量。另外,如果配制已知濃度的標(biāo)準(zhǔn)肽段,用PRM額外做一個(gè)標(biāo)準(zhǔn)曲線,即可實(shí)現(xiàn)一定的定量。PRM靶向定量蛋白質(zhì)組學(xué)技術(shù)能應(yīng)用到哪些方面?研究工作中涉及到蛋白或多肽定量的都可以通過PRM技術(shù)來實(shí)現(xiàn)。具體說來,比如驗(yàn)證定量蛋白質(zhì)組學(xué)中某些蛋白的變化,多肽的相對(duì)和一定的定量,想做蛋白定量卻沒有抗體,針對(duì)蛋白修飾位點(diǎn)的定量,想同時(shí)定量多個(gè)蛋白的情況等,都可以用PRM來做。蛋白質(zhì)組的概念與基因組的概念有許多差別。

蛋白質(zhì)組學(xué)技術(shù):生物質(zhì)譜:生物質(zhì)譜技術(shù)是蛋白質(zhì)組學(xué)研究中比較重要的鑒定技術(shù),其基本原理是樣品分子離子化后,根據(jù)不同離子之間的荷質(zhì)比(M/E)的差異來分離并確定分子量。對(duì)于經(jīng)過雙向電泳分離的目標(biāo)蛋白質(zhì)用胰蛋白酶酶解(水解Lys或Arg的-C端形成的肽鍵)成肽段,對(duì)這些肽段用質(zhì)譜進(jìn)行鑒定與分析。目前常用的質(zhì)譜包括兩種:基質(zhì)輔助激光解吸電離-飛行時(shí)間質(zhì)譜(MALDI-TOF-MS)和電噴霧質(zhì)譜(ESI-MS)。蛋白質(zhì)組的研究不但能為生命活動(dòng)規(guī)律提供物質(zhì)基礎(chǔ),也能為眾多種疾病機(jī)理的闡明及攻克提供理論根據(jù)和解決途徑。在對(duì)早老性癡呆等人類重大疾病的臨床診斷和治理方面蛋白質(zhì)組技術(shù)也有十分誘人的前景。貴陽DIA定量蛋白質(zhì)組學(xué)領(lǐng)域

生物質(zhì)譜技術(shù)是蛋白質(zhì)組學(xué)研究中比較重要的鑒定技術(shù)。湖北定量蛋白組學(xué)質(zhì)譜分析

蛋白質(zhì)組的研究不但能為生命活動(dòng)規(guī)律提供物質(zhì)基礎(chǔ),也能為眾多種疾病機(jī)理的闡明及攻克提供理論根據(jù)和解決途徑。通過對(duì)正常個(gè)體及病理個(gè)體間的蛋白質(zhì)組比較分析,我們可以找到某些“疾病特異性的蛋白質(zhì)分子”,它們可成為新藥物設(shè)計(jì)的分子靶點(diǎn),或者也會(huì)為疾病的早期診斷提供分子標(biāo)志。確實(shí),那些世界范圍內(nèi)銷路比較好的藥物本身是蛋白質(zhì)或其作用靶點(diǎn)為某種蛋白質(zhì)分子。因此,蛋白質(zhì)組學(xué)研究不只是探索生命奧秘的必須工作,也能為人類健康事業(yè)帶來巨大的利益。蛋白質(zhì)組學(xué)的研究是生命科學(xué)進(jìn)入后基因時(shí)代的特征。湖北定量蛋白組學(xué)質(zhì)譜分析

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