靶向代謝組學的一般分析流程為:1. 數(shù)據(jù)采集 第1步是得到標準品。如果無法從市場上買到,就必須定制合成。然后通過優(yōu)化產(chǎn)物離子碰撞能量以得到的信號,再通過測定三重串聯(lián)四極桿測定代謝物的 MRM 躍遷值。2. 定量 接下來用定量分析軟件對 MRM 數(shù)據(jù)進行處理,得到報告。3. 統(tǒng)計分析和解釋 將定量報告輸入統(tǒng)計分析軟件包,用統(tǒng)計工具,如ANOVA,對數(shù)據(jù)進行處理。靶向分析:在基于質(zhì)譜的代謝組學分析中,要意識到離子強度和色譜保留時間都會隨著時間的推移而產(chǎn)生漂移,所以在實驗中,要按隨機順序?qū)颖具M行檢測,且數(shù)據(jù)需要在同天同一批次進行采集,以減少誤差。非靶向代謝組學(Untargeted metabolomics)即非目標代謝組學或發(fā)現(xiàn)代謝組學。南京動物靶向代謝組學應用
靶向代謝組學分析成功的關鍵因素是準確度、高通量和可靠性。靶向代謝組學鑒定一般采用 GC/MS 系統(tǒng)的選擇性離子監(jiān)測 (SIM),或在三重串聯(lián)四極桿 LC/MS 系統(tǒng)上用多反應離子監(jiān)測 (MRM) 進行靶向 MS/MS。SIM 比全掃描圖譜采集具有更高的靈敏度,在單四極桿質(zhì)譜中,這種靈敏度增強的原因是延長了所選擇離子的采集時間。因為監(jiān)測的是一個很小的質(zhì)量窗口,所以質(zhì)量色譜圖只表示對極為特定質(zhì)量的檢測。在大多數(shù)情況下,靈敏度可以提高 10 倍。MRM 是進行質(zhì)譜定量的選擇方法,與 SIM 相比更為靈敏、更加特異??梢援a(chǎn)生獨特的碎片離子,可對非常復雜基質(zhì)中的目標化合物進行監(jiān)測和定量。河南GC-MS非靶向代謝組學分析靶向代謝組學著重對于設定好的目標代謝物進行定性、量檢測分析和研究。
靶向代謝組學:靶向代謝組學(Targeted Metabolomics)是代謝組學研究的重要組成部分,也是全代謝組研究的延伸與拓展。相對于全代謝組分析而言,靶向代謝組分析具有特異性強,檢測靈敏度高和定量準確等幾個特點。通過對血液、尿液或其他體液以及組織中某一特定的代謝物的富集與準確定量定性分析,一方面可以結(jié)合其它實驗數(shù)據(jù)揭示相關的分子生物學作用機制,另一方面,也可以為后續(xù)代謝分子標志物的深入研究和開發(fā)利用提供有力支持。靶向代謝組學可以用于:驗證有非靶向代謝組學實驗提出的假說;進行基于假說的探索性實驗,針對特定代謝物,研究代謝模型。
藥物代謝和代謝組學區(qū)別:代謝組學與藥物代謝不同是它關注的對象不是外源性的藥物而是生物體本身就有的內(nèi)源性代謝物。這些代謝物是糖,脂肪,蛋白質(zhì),核酸,膽汁酸等等代謝得到的。還有共生菌代謝的,是一個龐大的混合物。目的是通過樣本的對比,發(fā)現(xiàn)潛在標志物,指導疾病早期診斷甚至基因水平的研究。而藥物代謝的目標是只要只要追蹤到這種藥物分子在體內(nèi)變化就好,相當具有靶向性,因此使用的技術手段就是LC-MS。檢測藥物的中間體,和具體的藥效,藥代動的效應。代謝組學關注的對象是分子量在1000以下的小分子化合物。
代謝組學樣品收集方法及所需樣本量是什么?(1) 血清樣品: 避免反復凍融。血液收集在離心管中靜置30分鐘進行凝血。8000rpm離心10分鐘,取上清分裝到凍存管中,放置液氮中或-80度凍存;單個樣本要求體積為50μL。(2) 尿液樣品:臨床樣本請全部取清晨第1次尿液。尿液直接分裝到離心管中,8000rpm離心10分鐘,取上清分裝到凍存管中,放置液氮中或-80度凍存,-80度凍存;單個樣本要求體積為100μL。(3) 其他樣本收集辦法請咨詢譜領工作人員。代謝組學是繼基因組學和蛋白質(zhì)組學之后新近發(fā)展起來的一門學科。河南GC-MS非靶向代謝組學分析
較低的費用,是促使代謝組學在臨床上易于接受的另一個原因。南京動物靶向代謝組學應用
代謝組學的研究對象與層次有哪些?一般來說,代謝組學關注的對象是分子量在1000以下的小分子化合物。根據(jù)研究的對象和目的不同,科學家將生物體系的代謝產(chǎn)物分析分為4個層次:代謝物靶標分析:某一個或幾個特定組分的定性和定量分析,如某一類結(jié)構、性質(zhì)相關的化合物(氨基酸、有機酸、順二醇類)或者某一代謝途徑的所有中間產(chǎn)物或多條代謝途徑的標志性組分。代謝物指紋分析:同時對多個代謝物進行分析,不分離鑒定具體單一組分。代謝輪廓分析:限定條件下對生物體內(nèi)特定組織內(nèi)的代謝產(chǎn)物的快速定性和半定量分析。代謝組分析:對生物體或體內(nèi)某一特定組織所包含的所有代謝物的定量分析,并研究該代謝物組在外界干預或病理生理條件下的動態(tài)變化規(guī)律。南京動物靶向代謝組學應用
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