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什么是蛋白質的翻譯后修飾?蛋白質的翻譯后修飾()是指蛋白質在翻譯后的化學修飾。對于大部分的蛋白質來說,這是蛋白質生物合成的較后步驟。PTM是細胞信號傳導中的重要組成部分。通過向修飾基團添加一個或多個氨基酸殘基或通過蛋白質水解切割該基團來改變蛋白質的性質,是蛋白質生物學功能表達的重要步驟。生物蛋白質的翻譯后修飾極大地增加了蛋白質結構的類型和功能。這個過程調節(jié)細胞周期和蛋白質轉錄,并影響表觀遺傳學。蛋白質磷酸化修飾的免疫印跡技術優(yōu)點:能夠特異鑒定單個磷酸化位點。武漢蛋白質甲基化修飾組學價格
蛋白質翻譯后修飾分析策略:早期蛋白質組研究的大部分工作集中在細胞生長的不同時期,或疾病或有絲分裂原刺激后的蛋白質表達水平的變化。然而,許多生命過程不只受蛋白質的相對豐度控制,還受時空分布可逆的翻譯后修飾控制。因此,揭示翻譯后修飾的規(guī)律是了解蛋白質復雜性和多樣的生物學功能的前提。蛋白質的翻譯后修飾是一個復雜的過程。目前,發(fā)現(xiàn)的比較常見的修飾類型是糖基化、泛素化和磷酸化。樣品中翻譯后修飾蛋白質含量低、動態(tài)范圍廣給相關研究帶來了很大的挑戰(zhàn)?;诜g后修飾蛋白的異質性和相對豐度低的特點,主要利用凝膠、生物質譜和生物信息學工具對其進行研究。用于PTM分析的質譜方法類似于用于“常規(guī)”蛋白質鑒定的方法,包括自下而上、自中而下和自上而下的蛋白質組學分析。湖北蛋白質甲基化修飾組學價錢蛋白質翻譯后修飾有什么生物學意義?
蛋白質學組翻譯后修飾分析自中而下分析策略:自中而下的蛋白質組學技術可用于組蛋白修飾的分析。樣品制備與普遍使用的自下而上的分析策略相同,直到得到純化的組蛋白。提取組蛋白后,用GluC進行消化。然后用弱陽離子交換/親水相互作用色譜(WCX-HILIC)與配備電子轉移解離(ETD)的高分辨率質譜聯(lián)機聯(lián)用,對樣品進行理想的分離。譜識別可以用傳統(tǒng)的軟件進行,但是由于估計適當?shù)腻e誤發(fā)現(xiàn)率的問題,需要對結果進行過濾。自上而下的技術可以直接引入完整的蛋白質并在串聯(lián)質譜儀上對其進行片段化,不需要蛋白質水解消化。目前,有兩種完全分離蛋白質的方法:離線和在線。前者用四維分離法,后者用WCX-HILIC。
翻譯后修飾蛋白組學分析:蛋白質組學的研究的工作不只聚焦于細胞不同生長時期或是疾病條件下的蛋白質表達水平變化,許多至關重要的生命進程不只由蛋白質相對豐度控制,更重要的是被時空特異分布的、可逆的翻譯后修飾所調控,因而揭示翻譯后修飾發(fā)生規(guī)律是解析蛋白質復雜多樣的生物功能的一個重要前提。蛋白質發(fā)生翻譯后修飾時其分子質量會發(fā)生響應的改變,通過質譜能夠精確測定蛋白質或多肽的分子質量。同時,發(fā)生翻譯后修飾的蛋白質再樣本中含量低且動態(tài)范圍廣,所以在質譜檢測前需要對發(fā)生修飾的蛋白質或肽段進行富集。蛋白質磷酸化修飾的免疫印跡技術優(yōu)點:檢測特異性高。
蛋白質翻譯后修飾組學:翻譯后修飾自下而上分析策略:自下而上蛋白質組學是一種基于肽段分析的技術。對于不同類型的翻譯后修飾,具體的分析策略存在差異。蛋白質的糖基化具有異質性。不同的糖鏈可以連接到同一位點上,不同位點可以連接到同一蛋白質上的不同糖鏈上。糖基化的異質性嚴重阻礙了糖蛋白的分離和分析。不同糖類型的相同蛋白質,在電泳上會出現(xiàn)分散的條帶,導致信號分散。此外,對低豐度蛋白質的識別性差導致糖蛋白在色譜圖中分離不佳,質譜中有一簇分子量不準確的分辨不清的峰。目前,蛋白糖基化研究的主要策略是利用現(xiàn)有的技術體系對糖基化蛋白的糖基化肽段進行分離和富集,消除糖基化的異質性及其對質譜的影響,標記糖基化位點。蛋白質乙?;揎椊M學技術對細胞核內轉錄調控因子的刺激有著重要的作用。北京蛋白質棕櫚?;揎椊M學主要技術
質譜可以分辨蛋白質修飾前和修飾后分子量上的變化。武漢蛋白質甲基化修飾組學價格
翻譯后修飾蛋白組分析:蛋白質翻譯后修飾是影響蛋白質功能并調節(jié)整個細胞過程的重要方式,幾乎在每個細胞過程中都是不可或缺的。分析和鑒定翻譯后修飾蛋白質對揭示蛋白質的功能和深入了解各種生理現(xiàn)象具有重要意義。大多數(shù)翻譯后修飾蛋白以低化學計量和豐度存在,這限制了在分析全細胞裂解液時對其的檢測。因此,要在蛋白質組學的范圍內表征翻譯后修飾蛋白,純化方法是必要的,以分離修飾蛋白和肽段,然后再進行后續(xù)分析。后續(xù)分析一般采用質譜技術進行,可以對翻譯后修飾蛋白組進行定性和定量研究。武漢蛋白質甲基化修飾組學價格
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