蛋白質(zhì)學(xué)組翻譯后修飾的類型:翻譯后修飾的類型包括N端fMet或Met的去除、二硫鍵的形成、化學(xué)修飾和肽鍵的裂解,其中磷酸化是比較常見的。蛋白質(zhì)的化學(xué)修飾反應(yīng)是在維持蛋白質(zhì)的完整性和功能性的基礎(chǔ)上,通過基于其氨基酸殘基的化學(xué)反應(yīng)獲得新的生物結(jié)合物。翻譯后修飾在哪里發(fā)生?翻譯后修飾主要發(fā)生在氨基酸側(cè)鏈或蛋白質(zhì)的C端或N端?,F(xiàn)有的官能團或新官能團的引入可被用于修飾蛋白質(zhì),以擴展20個標準氨基酸的化學(xué)組成。翻譯后修飾的位點通常帶有可以在化學(xué)反應(yīng)中充當親核試劑的官能團,如絲氨酸、蘇氨酸和酪氨酸的羥基;賴氨酸、精氨酸和組氨酸胺形式;同時,在蛋白質(zhì)的N端和C端,天冬酰胺也可作為翻譯后修飾中的一種聚糖連接點。翻譯后修飾也發(fā)生在氧化的蛋氨酸和側(cè)鏈位點的一些亞甲基上。蛋白質(zhì)糖基化是一種常見的蛋白質(zhì)翻譯后修飾。北京蛋白質(zhì)亞硝基化修飾組學(xué)研究
蛋白質(zhì)翻譯后修飾在蛋白質(zhì)中磷酸化位點分析時應(yīng)該注意些什么問題?覆蓋率:覆蓋率越高,檢測和鑒定含有修飾基團的肽幾率就越大。修飾位點的占有率:被修飾的蛋白質(zhì)的百分比低,則檢測到修飾肽的機會會隨之減少。如果百分比較高(> 30%),則有助于識別修飾位點。棕櫚?;鞍仔揎椯|(zhì)譜鑒定方法:S-棕櫚?;闹饕δ苁谴龠M蛋白質(zhì)與細胞膜的結(jié)合。蛋白質(zhì)可以由一個棕櫚?;M成,也可以與更多棕櫚基或與其他脂質(zhì),如豆蔻?;S捎趯-棕櫚?;鞍追治鋈匀痪哂刑魬?zhàn)性,由于S-棕櫚酰化修飾蛋白亞水平以及疏水性和潛在不穩(wěn)定的硫代質(zhì)鏈的S-脂?;摹,F(xiàn)在常用的幾種方法可以捕獲S-脂酰化蛋白以及對目標修飾蛋白進行捕獲。貴州蛋白質(zhì)丙酰化修飾組學(xué)價錢蛋白質(zhì)糖基化指碳水化合物通過共翻譯或翻譯后修飾的方式附著到蛋白質(zhì)上的過程。
蛋白質(zhì)-蛋白質(zhì)相互作用是蛋白質(zhì)發(fā)揮功能的主要機制之一,在DNA損傷修復(fù),自噬和代謝等過程中都扮演著非常重要的角色,蛋白相互作用異常便會導(dǎo)致疾病的發(fā)生.在蛋白質(zhì)的賴氨酸,絲氨酸和蘇氨酸等氨基酸殘基上,可發(fā)生甲基化,乙?;?磷酸化和泛素化等200多種翻譯后修飾,這些修飾通常能改變蛋白質(zhì)的電性,疏水性和空間結(jié)構(gòu)等屬性,為與之結(jié)合的蛋白提供結(jié)合的錨定或產(chǎn)生位阻效應(yīng),像一把開關(guān)在時空上精確調(diào)控蛋白質(zhì)-蛋白質(zhì)相互作用的發(fā)生以及動態(tài)變化.結(jié)構(gòu)研究表明,蛋白質(zhì)之間的相互作用通常由臨近的幾個氨基酸殘基直接結(jié)合,替換該區(qū)域的氨基酸殘基,通常能破壞結(jié)合,使其失去部分功能或酶活性,可以針對性地開發(fā)和設(shè)計抑制劑,用于疾病的診療。
蛋白磷酸化修飾過程:蛋白磷酸化修飾這一過程是通過蛋白激酶催化,將磷酸基團從ATP轉(zhuǎn)移到多肽底物的絲氨酸、蘇氨酸,或酪氨酸殘基上。并且磷酸化修飾的過程是可逆的,去磷酸化反應(yīng)由蛋白磷酸酶催化完成。蛋白磷酸化檢測方法:Western Blot檢測方法:Western Blot是檢測蛋白磷酸化水平的常用方法,主要過程為先利用SDS-PAGE分離蛋白質(zhì),隨后將蛋白質(zhì)轉(zhuǎn)移到PVDF膜上,然后使用特異性識別磷酸化蛋白的抗體來鑒定目標蛋白的磷酸化水平。只有被磷酸化修飾的蛋白才會在相應(yīng)分子質(zhì)量的地方顯現(xiàn)特異性蛋白條帶。質(zhì)譜是蛋白質(zhì)翻譯后修飾檢測的常用技術(shù)之一。
翻譯后修飾蛋白組學(xué)分析:蛋白質(zhì)組學(xué)的研究的工作不只聚焦于細胞不同生長時期或是疾病條件下的蛋白質(zhì)表達水平變化,許多至關(guān)重要的生命進程不只由蛋白質(zhì)相對豐度控制,更重要的是被時空特異分布的、可逆的翻譯后修飾所調(diào)控,因而揭示翻譯后修飾發(fā)生規(guī)律是解析蛋白質(zhì)復(fù)雜多樣的生物功能的一個重要前提。蛋白質(zhì)發(fā)生翻譯后修飾時其分子質(zhì)量會發(fā)生響應(yīng)的改變,通過質(zhì)譜能夠精確測定蛋白質(zhì)或多肽的分子質(zhì)量。同時,發(fā)生翻譯后修飾的蛋白質(zhì)再樣本中含量低且動態(tài)范圍廣,所以在質(zhì)譜檢測前需要對發(fā)生修飾的蛋白質(zhì)或肽段進行富集。質(zhì)譜可以分辨蛋白質(zhì)修飾前和修飾后分子量上的變化。北京蛋白質(zhì)磷酸化修飾組學(xué)分析方法
泛素化修飾是一種重要的翻譯后修飾。北京蛋白質(zhì)亞硝基化修飾組學(xué)研究
蛋白質(zhì)翻譯后修飾:蛋白質(zhì)的翻譯后修飾通過可逆的共價鍵將小分子或蛋白質(zhì)與底物蛋白質(zhì)上特定的氨基酸結(jié)合,調(diào)控著底物的酶活性、功能以及三級結(jié)構(gòu)的變化。各種蛋白質(zhì)翻譯后修飾在信號通路和網(wǎng)絡(luò)中發(fā)揮著重要的作用,翻譯后修飾系統(tǒng)的紊亂將導(dǎo)致一系列疾病的發(fā)生。通過實驗的方法鑒定蛋白質(zhì)翻譯后修飾的位點需要耗費大量的資金和時間,并且酶反應(yīng)的優(yōu)化常常難以實現(xiàn)。而計算的方法則能夠快速、準確的預(yù)測酶特異性的底物蛋白質(zhì)及其修飾位點。北京蛋白質(zhì)亞硝基化修飾組學(xué)研究
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