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杭州外泌體蛋白質(zhì)組學(xué)研究方法

來源: 發(fā)布時(shí)間:2022-05-08

蛋白質(zhì)組學(xué)樣品寄樣要求:動(dòng)物組織的樣本蛋白量相對較高,送樣量的要求也相對比較寬松,一般提供50~100mg的量即可。此外,組織上有血跡、脂肪、結(jié)締組織的還需要用PBS和組織剪將其清理干凈。送樣前將樣品用液氮速凍5min,放置在-80℃保存,送樣時(shí)需要置于干冰環(huán)境中運(yùn)輸。動(dòng)物的懸浮培養(yǎng)細(xì)胞也是比較熱門的蛋白組學(xué)研究對象,如果想做細(xì)胞的蛋白組學(xué),起碼需要1×107個(gè)細(xì)胞,離心后收集,置于-80攝氏度環(huán)境中。蛋白質(zhì)組學(xué),指對某一基因組所表達(dá)的所有蛋白質(zhì)及其特征進(jìn)行大規(guī)模、系統(tǒng)化地研究,以期望在蛋白質(zhì)水平上解釋控制復(fù)雜的生命活動(dòng)的分子網(wǎng)絡(luò)。蛋白質(zhì)組研究技術(shù)涉及到各種重要的生物學(xué)現(xiàn)象,如信號轉(zhuǎn)導(dǎo)、細(xì)胞分化、蛋白質(zhì)折疊等等。杭州外泌體蛋白質(zhì)組學(xué)研究方法

蛋白質(zhì)組學(xué)研究策略:蛋白質(zhì)組學(xué)研究主要分為自底向上(Bottom-Up),自頂向下(Top-Down)和自中向下(Middle-Down)三種策略?!白缘紫蛏稀辈呗允侵竿ㄟ^分析由蛋白質(zhì)酶解生成的肽段來鑒定蛋白質(zhì)。當(dāng)應(yīng)用該策略來分析蛋白質(zhì)組混合物時(shí),因其類似于基因組測序的鳥管法,所以又被稱為鳥管法蛋白質(zhì)組學(xué)(Shotgun Proteomics),該策略依賴于蛋白酶的酶切?!白灾邢蛳隆辈呗砸惨蕾囉诘鞍酌傅拿盖校怯捎诓捎昧肆硗獾拿?,比如OmpT,只能酶切(Lys/Arg-Lys/Arg),因此酶切之后的分子量較大,更利于后續(xù)的蛋白組裝環(huán)節(jié)。浙江定量N糖基化蛋白質(zhì)組學(xué)研究蛋白質(zhì)組具有很高的細(xì)胞和組織特異性,不同的細(xì)胞組織表達(dá)不同的蛋白質(zhì)組。

蛋白質(zhì)組學(xué)的分析介紹:蛋白質(zhì)組學(xué)的分析主要指蛋白的生信分析,依賴于數(shù)據(jù)庫的建立?,F(xiàn)在常用的蛋白質(zhì)組學(xué)生信分析有GO功能分析和KEGG通路分析。GO(gene ontology)是基因本體聯(lián)合會(huì)(Gene Onotology Consortium)所建立的數(shù)據(jù)庫。根據(jù)基因產(chǎn)物的相關(guān)分子功能、生物學(xué)途徑、細(xì)胞組分而給予定義,無物種相關(guān)性。是系統(tǒng)分析基因功能,它將基因組的信息與基因功能聯(lián)系起來,旨在揭示生命現(xiàn)象的遺傳與化學(xué)藍(lán)圖。旨在借助計(jì)算機(jī)全方面地展示細(xì)胞和生物所包含的生物學(xué)信息;根據(jù)基因組中的信息,用計(jì)算機(jī)計(jì)算或者預(yù)測出比較復(fù)雜的細(xì)胞中的通路或者生物的復(fù)雜行為。

蛋白質(zhì)組學(xué)技術(shù):生物質(zhì)譜:生物質(zhì)譜技術(shù)是蛋白質(zhì)組學(xué)研究中比較重要的鑒定技術(shù),其基本原理是樣品分子離子化后,根據(jù)不同離子之間的荷質(zhì)比(M/E)的差異來分離并確定分子量。對于經(jīng)過雙向電泳分離的目標(biāo)蛋白質(zhì)用胰蛋白酶酶解(水解Lys或Arg的-C端形成的肽鍵)成肽段,對這些肽段用質(zhì)譜進(jìn)行鑒定與分析。目前常用的質(zhì)譜包括兩種:基質(zhì)輔助激光解吸電離-飛行時(shí)間質(zhì)譜(MALDI-TOF-MS)和電噴霧質(zhì)譜(ESI-MS)。蛋白質(zhì)組的研究不但能為生命活動(dòng)規(guī)律提供物質(zhì)基礎(chǔ),也能為眾多種疾病機(jī)理的闡明及攻克提供理論根據(jù)和解決途徑。在對早老性癡呆等人類重大疾病的臨床診斷和治理方面蛋白質(zhì)組技術(shù)也有十分誘人的前景。

蛋白質(zhì)組學(xué)(英語:proteomics,又譯作蛋白質(zhì)體學(xué)),是以蛋白質(zhì)組為研究對象,研究細(xì)胞、組織或生物體蛋白質(zhì)組成及其變化規(guī)律的科學(xué)。蛋白質(zhì)組學(xué)研究不只是探索生命奧秘的必須工作,也能為人類健康事業(yè)帶來巨大的利益,是生命科學(xué)進(jìn)入后基因時(shí)代的特征。蛋白質(zhì)是生命存在和運(yùn)動(dòng)的物質(zhì)基礎(chǔ),是細(xì)胞增殖、分化、衰老和凋亡等重大生命活動(dòng)的執(zhí)行者,亦是基因功能活動(dòng)的之后的執(zhí)行者,是生命現(xiàn)象復(fù)雜性和多變性的直接體現(xiàn)者。蛋白質(zhì)組研究是為了識別及鑒定一個(gè)細(xì)胞或組織所表達(dá)的全部蛋白質(zhì)以及它們的表達(dá)模式,是對基因組研究的重要補(bǔ)充,是對生物體在蛋白質(zhì)水平上定量、動(dòng)態(tài)、整體性的研究。這類研究有助于了解蛋白的結(jié)構(gòu)、細(xì)胞的功能、生命的本質(zhì)及活動(dòng)規(guī)律,為疾病的診斷、疫苗及新藥開發(fā)提供科學(xué)依據(jù)。蛋白質(zhì)組學(xué)的研究是生命科學(xué)進(jìn)入后基因時(shí)代的特征。哈爾濱定量N糖基化蛋白質(zhì)組學(xué)價(jià)錢

蛋白質(zhì)組學(xué)相關(guān)技術(shù)目前在一小部分]應(yīng)用中具有獨(dú)特優(yōu)勢。杭州外泌體蛋白質(zhì)組學(xué)研究方法

定量N-糖基化蛋白質(zhì)組學(xué):蛋白質(zhì)的N-糖基化位點(diǎn)修飾是重要的蛋白質(zhì)翻譯后修飾之一,主要在復(fù)雜的多細(xì)胞或組織形成過程中起關(guān)鍵作用。蛋白質(zhì)的N-糖基化修飾位點(diǎn)具有保守的氨基酸序列NX(S/T)(其中X為除脯氨酸以外的其它氨基酸)凝集素親和法是目前糖蛋白質(zhì)組學(xué)中應(yīng)用普遍的分離富集方法。凝集素(lectin)是一類糖結(jié)合蛋白質(zhì),能專一識別某一特殊結(jié)構(gòu)的單糖或聚糖中特定的糖基序列而與之結(jié)合,它們與糖鏈可逆非共價(jià)結(jié)合,糖蛋白或糖肽被凝集素捕獲之后,通常用特定的單糖通過競爭結(jié)合凝集素將糖蛋白或糖肽洗脫下來。蛋白質(zhì)經(jīng)過酶解后利用lectin 富集 N- 糖基化肽段,然后用 N- 糖酰胺酶(PNGase)在 H218O 中切除連接在天冬酰胺殘基(Asn)上的糖鏈。杭州外泌體蛋白質(zhì)組學(xué)研究方法