蛋白質(zhì)組學(xué)研究這樣做:蛋白質(zhì)組與基因組相對應(yīng),也是一個整體的概念,隨著基因組學(xué)研究的不斷深入,蛋白質(zhì)組學(xué)已逐漸成為研究熱點,對蛋白組學(xué)的研究可以使我們更容易接近生命的機理本質(zhì),但探究成千上萬的蛋白質(zhì)特性也是一個重大的技術(shù)挑戰(zhàn)。蛋白質(zhì)組(Proteome)指的是某一時刻或某一狀態(tài)基因組表達(dá)的所有相應(yīng)的蛋白,即細(xì)胞、組織或機體全部蛋白質(zhì)的存在及活動形式,其是一個動態(tài)概念,它是在組織、細(xì)胞的整體蛋白質(zhì)水平上,探索蛋白質(zhì)作用模式、功能機理、調(diào)節(jié)控制以及蛋白質(zhì)群體內(nèi)的相互關(guān)系、從而獲得生命活動調(diào)控網(wǎng)絡(luò)的全方面而深入的認(rèn)識,以揭示生命活動的基本規(guī)律。蛋白質(zhì)組學(xué)相關(guān)技術(shù)目前在一小部分]應(yīng)用中具有獨特優(yōu)勢。湖北Label free多肽組學(xué)價格
PRM靶向定量蛋白質(zhì)組學(xué)分析流程是怎樣的?要做PRM首先要明確目標(biāo)蛋白(或多肽)是什么,設(shè)計和建立針對這些目標(biāo)蛋白PRM質(zhì)譜采集方法,然后對待測樣品進(jìn)行PRM數(shù)據(jù)采集,將得到的原始譜圖數(shù)據(jù)導(dǎo)入分析軟件提取子離子信息進(jìn)行定量。另外,如果配制已知濃度的標(biāo)準(zhǔn)肽段,用PRM額外做一個標(biāo)準(zhǔn)曲線,即可實現(xiàn)一定的定量。PRM靶向定量蛋白質(zhì)組學(xué)技術(shù)能應(yīng)用到哪些方面?研究工作中涉及到蛋白或多肽定量的都可以通過PRM技術(shù)來實現(xiàn)。具體說來,比如驗證定量蛋白質(zhì)組學(xué)中某些蛋白的變化,多肽的相對和一定的定量,想做蛋白定量卻沒有抗體,針對蛋白修飾位點的定量,想同時定量多個蛋白的情況等,都可以用PRM來做。北京修飾蛋白組學(xué)分析研究蛋白質(zhì)組學(xué)技術(shù)有等電聚焦。
定量蛋白質(zhì)組學(xué)分析:特點:(1)不同樣本標(biāo)記之后混樣,統(tǒng)一處理上機,減少了分別上機造成的實驗誤差,并利用同位素標(biāo)簽的豐度來檢測,定量更準(zhǔn)確,重復(fù)性更好;(2)由于需要標(biāo)記試劑標(biāo)記,因此成本相對較高;(3)通量高,在一次實驗中比較多可同時比較8個樣品;(4)利用基于同一個參考樣品的辦法,可以進(jìn)行多于8個樣品的定量比較;(5)iTRAQ的覆蓋度高、靈敏度高。Label-Free定量蛋白質(zhì)組學(xué)分析:Label-Free定量,即非標(biāo)記的定量蛋白質(zhì)組學(xué),不需要對比較樣本做特定標(biāo)記處理,只需要比較特定肽段/蛋白在不同樣品間的色譜質(zhì)譜響應(yīng)信號便可得到樣品間蛋白表達(dá)量的變化,通常用于分析大規(guī)模蛋白鑒定和定量時所產(chǎn)生的質(zhì)譜數(shù)據(jù)。
我國科學(xué)家已經(jīng)在重大疾病如肝病、維甲酸誘導(dǎo)白血病細(xì)胞凋亡啟動模型及維甲酸定向誘導(dǎo)胚胎干細(xì)胞向神經(jīng)系統(tǒng)分化的模型等比較蛋白質(zhì)組研究以及一些重要生理和病理體系的蛋白質(zhì)組成分研究方面獲得了重要成就。蛋白質(zhì)組學(xué)的重要應(yīng)用領(lǐng)域有:在臨床疾病中的應(yīng)用、在微生物蛋白質(zhì)組學(xué)中的應(yīng)用、在植物研究中的應(yīng)用、在腎臟病學(xué)領(lǐng)域的應(yīng)用。我們通過研究蛋白質(zhì)組,可以為患者提供有用的疾病診斷、診療、預(yù)后評估信息;可以早期更為準(zhǔn)確的診斷出胰腺?。灰部梢詾锳D的診斷、診療藥物的設(shè)計和篩選奠定基礎(chǔ)。這項研究技術(shù)其實離我們生活非常近,對我們生命而言尤為重要。近年來,高通量蛋白質(zhì)分離與鑒定技術(shù),如雙向電泳、生物質(zhì)譜、蛋白質(zhì)芯片、酵母雙雜交系統(tǒng)、生物信息學(xué)等相繼建立并日趨完善,加速了蛋白質(zhì)組學(xué)的發(fā)展。蛋白質(zhì)組隨著基因組學(xué)研究的不斷深入,蛋白質(zhì)組學(xué)已逐漸成為研究熱點。
LabelFree(非標(biāo)記蛋白質(zhì)組學(xué)技術(shù)):應(yīng)用:1.需要快速在大量樣本中找到差異表達(dá)的蛋白組合。2.需要在較短時間以較低成本得到具有提示意義的蛋白表達(dá)數(shù)據(jù)。3.需要檢測的樣品蛋白含量低。4.需要檢測相互作用蛋白。技術(shù)特點:1.對質(zhì)譜儀器設(shè)備要求較高,色譜和質(zhì)譜需要同時有較好的穩(wěn)定性和重復(fù)性。2.需要有特殊的定量分析軟件。3.對樣品中蛋白質(zhì)總量要求較低,實驗周期短,實驗費用低。4.不需要額外并且昂貴的標(biāo)記試劑,排除了標(biāo)記過程帶入實驗誤差的風(fēng)險,同時也不必考慮標(biāo)記效率的問題。蛋白質(zhì)組學(xué)由此獲得蛋白質(zhì)水平上的關(guān)于疾病發(fā)生,細(xì)胞代謝等過程的整體而全方面的認(rèn)識。北京蛋白質(zhì)組學(xué)應(yīng)用
蛋白質(zhì)組研究技術(shù)在研究對象上,覆蓋了原核微生物、真核微生物、植物和動物等范圍。湖北Label free多肽組學(xué)價格
定量蛋白質(zhì)組學(xué)方法學(xué)介紹:iTRAQ:iTRAQ定量是目前定量蛋白質(zhì)組學(xué)應(yīng)用比較普遍的技術(shù),該技術(shù)的關(guān)鍵原理是多肽標(biāo)記和定量,將多肽的含量轉(zhuǎn)化為114、115、116和117同位素的含量(或113、114、115、116、117、118、119和121的8標(biāo)記),從而簡化了定量的復(fù)雜性,然后通過多肽定量值回歸到蛋白的定量值,從而測定出不同樣本之間蛋白質(zhì)的差異。iTRAQ定量不依賴樣本,可檢測出較低豐度蛋白,胞漿蛋白、膜蛋白、胞外蛋白等,且定量準(zhǔn)確,可同時對8個樣本進(jìn)行分析,并可同時得出鑒定和定量的結(jié)果,特別適用于采用多種處理方式或來自多個處理時間的樣本的差異蛋白分析。湖北Label free多肽組學(xué)價格
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