定量蛋白質(zhì)組學(xué)技術(shù)：TMT定量蛋白組學(xué)技術(shù)：TMT(TandemMassTags)定量蛋白質(zhì)組學(xué)技術(shù)多肽體外標(biāo)記定量技術(shù)。這種技術(shù)采用多個（2-10）穩(wěn)定同位素標(biāo)簽，特異性標(biāo)記多肽的氨基基團(tuán)進(jìn)行串聯(lián)質(zhì)譜分析，能夠同時比較多達(dá)10種不同樣本中蛋白質(zhì)的相對含量，可用于研究不同病理條件下或者不同發(fā)育階段的組織樣品中蛋白質(zhì)表達(dá)水平的差異。iTRAQ定量蛋白組學(xué)技術(shù)是多肽體外標(biāo)記定量技術(shù)。這種技術(shù)同TMT定量蛋白組學(xué)技術(shù)相似，可研究不同病理條件下或者不同發(fā)育階段的組織樣品中蛋白質(zhì)表達(dá)水平的差異。蛋白質(zhì)組研究技術(shù)涉及到各種重要的生物學(xué)現(xiàn)象，如信號轉(zhuǎn)導(dǎo)、細(xì)胞分化、蛋白質(zhì)折疊等等。杭州PRM靶向定量蛋白質(zhì)組學(xué)鑒定

蛋白質(zhì)組學(xué)在醫(yī)學(xué)的研究應(yīng)用：蛋白質(zhì)組學(xué)(Proteomics)是研究細(xì)胞、組織或生物體中蛋白質(zhì)組成、定位、變化及其相互作用規(guī)律的科學(xué)。labelfree-非標(biāo)定量法分析技術(shù)方法：非標(biāo)定量法[Labelfree]是近年來重要的質(zhì)譜定量方法，通過比較質(zhì)譜分析次數(shù)或質(zhì)譜峰強(qiáng)度，分析不同來源樣品蛋白的數(shù)量變化。蛋白質(zhì)非標(biāo)記定量技術(shù)（LabelFree）是通過液質(zhì)聯(lián)用技術(shù)對蛋白質(zhì)酶解肽段進(jìn)行質(zhì)譜分析，無需使用昂貴的穩(wěn)定同位素標(biāo)簽做內(nèi)部標(biāo)準(zhǔn)，只需分析大規(guī)模鑒定蛋白質(zhì)時所產(chǎn)生的質(zhì)譜數(shù)據(jù)，比較不同樣品中相應(yīng)肽段的信號強(qiáng)度，從而對肽段對應(yīng)的蛋白質(zhì)進(jìn)行相對定量。上海PRM定量蛋白質(zhì)組學(xué)技術(shù)蛋白質(zhì)組學(xué)技術(shù)有電噴霧質(zhì)譜。

蛋白組究竟研究的是什么呢？第1，蛋白質(zhì)定性，或者說大規(guī)模檢測某些蛋白質(zhì)是否存在于樣品當(dāng)中；第2，蛋白質(zhì)定量，也就是大規(guī)模檢測某些蛋白質(zhì)的含量（包括一定含量與相對含量）；第3，蛋白質(zhì)翻譯后修飾，這些修飾主要包括磷酸化，泛素化，糖基化，乙?；鹊?，也包括對這些翻譯后修飾的定量研究。這三大塊中所提到的大規(guī)模，既可以是樣品數(shù)量的大規(guī)模高通量，也可以是少量樣本中蛋白數(shù)量的大規(guī)模高通量。研究原因：首先，由于翻譯調(diào)控和翻譯后調(diào)控的存在，RNA的表達(dá)量與實際對應(yīng)蛋白質(zhì)的含量相關(guān)性并不高，就簡單地測試了酵母中mRNA和對應(yīng)蛋白質(zhì)的定量相關(guān)性，結(jié)果是，低豐度蛋白與mRNA的相關(guān)性尤其低，而高豐度蛋白和其mRNA的相關(guān)性則高，經(jīng)過平均后r值只為0.4。

我們究竟怎么研究蛋白質(zhì)組學(xué)呢？目前高通量檢測蛋白質(zhì)的方法中，還是首推基于質(zhì)譜的方法，納流液相可以將復(fù)雜樣品中的肽段高效地分離，然后依次進(jìn)入質(zhì)譜，對每個被離子化的肽段及其碎裂后碎片的荷質(zhì)比進(jìn)行分析，從而得到該肽段的序列信息，然后根據(jù)對應(yīng)的色譜峰面積或者報告離子強(qiáng)度等信息，我們又可以得到該肽段的定量信息。蛋白組學(xué)研究怎么做？當(dāng)下蛋白組學(xué)研究中應(yīng)用比較普遍的技術(shù)是同位素標(biāo)記定量（iTRAQ/TMT技術(shù)）。iTRAQ/TMT技術(shù)是利用DDA掃描模式，其掃描的方式是將一級質(zhì)譜信號比較強(qiáng)的Top20的多肽進(jìn)行二級打碎，然后進(jìn)入二級質(zhì)譜進(jìn)行檢測。其優(yōu)勢是二級譜圖采集的肽段信息都來源于同一條多肽，有利于后續(xù)的定性分析。在未來的發(fā)展中，蛋白質(zhì)組學(xué)的研究領(lǐng)域?qū)⒏悠毡椤?/p>

蛋白組學(xué)研究怎么做？PRM:平行反應(yīng)監(jiān)測(ParallelReactionMonitoring)是一種基于高分辨、高精度質(zhì)譜的離子監(jiān)視技術(shù)，能夠?qū)δ繕?biāo)蛋白質(zhì)、目標(biāo)肽段（如發(fā)生翻譯后修飾的肽段）進(jìn)行選擇性檢測，從而實現(xiàn)對目標(biāo)蛋白質(zhì)/肽段進(jìn)行一定定量，因此也被稱之為基于液相色譜質(zhì)譜聯(lián)用技術(shù)的WesternBlot（LC-MSMSbasedWesternBlot,L-WB）。PRM技術(shù)基于Q-Orbitrap為表示的高分辨、高精度質(zhì)譜平臺，首先利用四級桿質(zhì)量分析器的選擇能力，用Q1選擇目標(biāo)肽段的母離子，隨后在Collisioncell中對母離子進(jìn)行碎裂，之后利用Orbitrap分析器在二級質(zhì)譜中檢測所選擇的母離子窗口內(nèi)的所有碎片信息。這樣即可對復(fù)雜樣本中的目標(biāo)蛋白質(zhì)/肽段進(jìn)行準(zhǔn)確地特異性分析。在對早老性癡呆等人類重大疾病的臨床診斷和治理方面蛋白質(zhì)組技術(shù)也有十分誘人的前景。上海PRM定量蛋白質(zhì)組學(xué)技術(shù)

蛋白質(zhì)組學(xué)包括翻譯后的修飾。杭州PRM靶向定量蛋白質(zhì)組學(xué)鑒定

我們究竟怎么研究蛋白質(zhì)組學(xué)呢？抗體免疫的方法呢，其實就是ELISA，Western及蛋白質(zhì)芯片。通過合成大量蛋白質(zhì)特異的抗體，能夠進(jìn)行定性檢測及相對定量分析，只要你有好用的抗體，那么就可以通過免疫反應(yīng)讓抗體快速的識別你感興趣的蛋白質(zhì)，然后用例如HRP發(fā)光等標(biāo)記方法顯示它們是否存在于你的樣品當(dāng)中?，F(xiàn)在已有的抗體不只能識別特定蛋白質(zhì)，還能識別特定修飾的特定蛋白質(zhì)或者被特定修飾過的特定蛋白質(zhì)Motif。蛋白質(zhì)組與基因組相對應(yīng)，也是一個整體的概念。杭州PRM靶向定量蛋白質(zhì)組學(xué)鑒定

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