定量蛋白質(zhì)組學(xué)技術(shù):定量蛋白質(zhì)組學(xué)技術(shù)主要分為標(biāo)記(label)和非標(biāo)記(labelfree)定量策略,標(biāo)記策略又分為體內(nèi)標(biāo)記和體外標(biāo)記兩種。細(xì)胞內(nèi)蛋白質(zhì)組豐度的動(dòng)態(tài)變化對(duì)各種生命過(guò)程有重要影響。例如在許多疾病的發(fā)生和發(fā)展進(jìn)程中,常常伴隨著某些蛋白質(zhì)的表達(dá)異常。定量蛋白質(zhì)組學(xué)就是把一個(gè)基因組表達(dá)的全部蛋白質(zhì)或一個(gè)復(fù)雜的混合體系中所有的蛋白質(zhì)進(jìn)行精確的定量和鑒定。非標(biāo)記(labelfree)的定量蛋白組學(xué)技術(shù),Labelfree定量蛋白組學(xué)技術(shù)是通過(guò)液質(zhì)聯(lián)用技術(shù)對(duì)蛋白質(zhì)酶解肽段進(jìn)行質(zhì)譜分析,無(wú)需使用昂貴的穩(wěn)定同位素標(biāo)簽做內(nèi)部標(biāo)準(zhǔn),只需分析大規(guī)模鑒定蛋白質(zhì)時(shí)所產(chǎn)生的質(zhì)譜數(shù)據(jù),比較不同樣品中相應(yīng)肽段的信號(hào)強(qiáng)度,從而對(duì)肽段對(duì)應(yīng)的蛋白質(zhì)進(jìn)行相對(duì)定量。蛋白質(zhì)組學(xué)在醫(yī)療和健康方面有什么應(yīng)用?TMT/iTRAQ標(biāo)記定量蛋白質(zhì)組學(xué)方法
LabelFree(非標(biāo)記蛋白質(zhì)組學(xué)技術(shù)):應(yīng)用:1.需要快速在大量樣本中找到差異表達(dá)的蛋白組合。2.需要在較短時(shí)間以較低成本得到具有提示意義的蛋白表達(dá)數(shù)據(jù)。3.需要檢測(cè)的樣品蛋白含量低。4.需要檢測(cè)相互作用蛋白。技術(shù)特點(diǎn):1.對(duì)質(zhì)譜儀器設(shè)備要求較高,色譜和質(zhì)譜需要同時(shí)有較好的穩(wěn)定性和重復(fù)性。2.需要有特殊的定量分析軟件。3.對(duì)樣品中蛋白質(zhì)總量要求較低,實(shí)驗(yàn)周期短,實(shí)驗(yàn)費(fèi)用低。4.不需要額外并且昂貴的標(biāo)記試劑,排除了標(biāo)記過(guò)程帶入實(shí)驗(yàn)誤差的風(fēng)險(xiǎn),同時(shí)也不必考慮標(biāo)記效率的問(wèn)題。上海PRM定量蛋白質(zhì)組學(xué)方法定量蛋白質(zhì)組學(xué)技術(shù)主要分為標(biāo)記(label)和非標(biāo)記(label free)定量策略。
蛋白質(zhì)組學(xué)主要以全蛋白組(組織、細(xì)胞)、線粒體蛋白組、葉綠體蛋白組和外泌體蛋白組為研究對(duì)象,通過(guò)對(duì)蛋白組進(jìn)行定性、定量、分子功能分析、通路互作分析和蛋白互作分析,揭示生物學(xué)功能、作用機(jī)制、疾病診斷的標(biāo)志物以及預(yù)測(cè)蛋白的上、下游變化關(guān)系。蛋白質(zhì)組學(xué)可以克服核酸水平預(yù)測(cè)的不確定性、反映核酸翻譯后修飾情況。常用技術(shù):非靶向蛋白組學(xué):蛋白質(zhì)定性(膠條鑒定和溶液鑒定),高通量定量蛋白組(Labelfree、iTRAQ/TMT和DIA定量),多肽組學(xué)。
蛋白質(zhì)組學(xué)在生物學(xué)領(lǐng)域的研究中的應(yīng)用是怎樣的?研究對(duì)象涉及到生物體且生物體內(nèi)表達(dá)蛋白,理論上都可以應(yīng)用蛋白質(zhì)組學(xué)。蛋白質(zhì)組學(xué)是以研究生物體蛋白組成及其變化規(guī)律為目的的應(yīng)用科學(xué)。主要使用的儀器為液質(zhì)聯(lián)用高分辨率質(zhì)譜儀。詳細(xì)來(lái)說(shuō),蛋白質(zhì)組學(xué)包含許多分支:非標(biāo)定量蛋白質(zhì)組學(xué)(定性研究生物體的蛋白組成),定量蛋白質(zhì)組學(xué)(對(duì)生物體蛋白表達(dá)含量進(jìn)行測(cè)定),修飾蛋白質(zhì)組學(xué)(對(duì)蛋白質(zhì)翻譯后修飾進(jìn)行檢測(cè))及相互作用蛋白質(zhì)組研究(蛋白質(zhì)直接相互作用機(jī)制解析)等。蛋白質(zhì)組學(xué)屬于后基因組時(shí)代的科學(xué)研究,針對(duì)基因表達(dá)產(chǎn)物進(jìn)行檢測(cè)與定量。因此更能反應(yīng)出生物體生理?xiàng)l件下的水平與狀態(tài)。蛋白質(zhì)組學(xué)包括翻譯后的修飾。
蛋白質(zhì)組學(xué)技術(shù):蛋白質(zhì)組學(xué)技術(shù)的發(fā)展已經(jīng)成為現(xiàn)代的生物技術(shù)快速發(fā)展的重要支撐,并將帶領(lǐng)生物技術(shù)取得關(guān)鍵性的突破。為幫助生命科學(xué)領(lǐng)域的工作者全方面掌握蛋白質(zhì)組學(xué)的技術(shù)與方法、實(shí)驗(yàn)難點(diǎn)與關(guān)鍵點(diǎn)、研究前沿與熱點(diǎn),包括雙向凝膠電泳、等電聚焦、生物質(zhì)譜分析及非凝膠技術(shù)。雙向凝膠電泳:雙向凝膠電泳的原理是第1向基于蛋白質(zhì)的等電點(diǎn)不同用等電聚焦分離,第二向則按分子量的不同用SDS-PAGE分離,把復(fù)雜蛋白混合物中的蛋白質(zhì)在二維平面上分開(kāi)。由于雙向電泳技術(shù)在蛋白質(zhì)組與醫(yī)學(xué)研究中所處的重要位置,它可用于蛋白質(zhì)轉(zhuǎn)錄及轉(zhuǎn)錄后修飾研究,蛋白質(zhì)組的比較和蛋白質(zhì)間的相互作用,細(xì)胞分化凋亡研究,致病機(jī)制及耐藥機(jī)制的研究,療效監(jiān)測(cè),新藥開(kāi)發(fā),病癥研究,蛋白純度檢查,小量蛋白純化,新替代疫苗的研制等許多方面。近年來(lái)經(jīng)過(guò)多方面改進(jìn)已成為研究蛋白質(zhì)組的比較有使用價(jià)值的關(guān)鍵方法。蛋白質(zhì)組學(xué)的研究是生命科學(xué)進(jìn)入后基因時(shí)代的特征。上海PRM定量蛋白質(zhì)組學(xué)方法
蛋白質(zhì)組的研究能為生命活動(dòng)規(guī)律提供物質(zhì)基礎(chǔ)。TMT/iTRAQ標(biāo)記定量蛋白質(zhì)組學(xué)方法
常規(guī)蛋白質(zhì)組學(xué):Labelfree多肽組學(xué):顧名思義,就是不使用任何標(biāo)記方法,直接對(duì)肽段進(jìn)行質(zhì)譜鑒定和定性定量分析。實(shí)驗(yàn)流程簡(jiǎn)單,只需要對(duì)蛋白進(jìn)行常規(guī)酶解和除鹽步驟即可上機(jī)。定量方式分為兩種:峰面積(Peakintensity)和峰計(jì)數(shù)(Spectralcount),常用的是峰面積。不過(guò),由于質(zhì)譜采集時(shí)只選取topN的母離子進(jìn)行二級(jí)碎裂和MS2檢測(cè),所以會(huì)丟失一些豐度較低的肽段信息,缺失值比較多。TMT/iTRAQ標(biāo)記定量蛋白組學(xué):TMT全稱(chēng)是TandemMassTag,是經(jīng)典化學(xué)標(biāo)記試劑,普遍用于差異表達(dá)蛋白質(zhì)組分析研究中。該技術(shù)采用6重、10重或16重同位素標(biāo)簽,與肽段的氨基發(fā)生共價(jià)結(jié)合反應(yīng),可實(shí)現(xiàn)同時(shí)對(duì)6個(gè)/10個(gè)/16個(gè)不同樣品中蛋白質(zhì)的定性和定量分析。(目前16標(biāo)鹿明生物可提供技術(shù)服務(wù))。TMT/iTRAQ標(biāo)記定量蛋白質(zhì)組學(xué)方法
上海拜譜生物科技有限公司是一家從事生物科技、醫(yī)療科技、化工科技和檢測(cè)科技領(lǐng)域內(nèi)的技術(shù)開(kāi)發(fā),技術(shù)轉(zhuǎn)讓?zhuān)夹g(shù)咨詢,技術(shù)服務(wù),軟件開(kāi)發(fā),化工原料及產(chǎn)品(除危險(xiǎn)化學(xué)品,監(jiān)控化學(xué)品,煙花爆竹,民用物,易制毒化學(xué)品)、儀器儀表的銷(xiāo)售。。。....的公司,致力于發(fā)展為創(chuàng)新務(wù)實(shí)、誠(chéng)實(shí)可信的企業(yè)。拜譜生物深耕行業(yè)多年,始終以客戶的需求為向?qū)?,為客戶提?**的多組學(xué)服務(wù),質(zhì)譜檢測(cè),蛋白質(zhì)組學(xué),代謝組學(xué)。拜譜生物繼續(xù)堅(jiān)定不移地走高質(zhì)量發(fā)展道路,既要實(shí)現(xiàn)基本面穩(wěn)定增長(zhǎng),又要聚焦關(guān)鍵領(lǐng)域,實(shí)現(xiàn)轉(zhuǎn)型再突破。拜譜生物始終關(guān)注商務(wù)服務(wù)行業(yè)。滿足市場(chǎng)需求,提高產(chǎn)品價(jià)值,是我們前行的力量。