全轉(zhuǎn)錄組測(cè)序?yàn)槭裁葱枰獦?gòu)建兩個(gè)文庫(kù)？全轉(zhuǎn)錄組測(cè)序需要構(gòu)建2個(gè)測(cè)序文庫(kù)，一個(gè)小RNA文庫(kù)和一個(gè)去除核糖體RNA的鏈特異性文庫(kù)，然后分別上機(jī)測(cè)序。小RNA長(zhǎng)度較短，一般小于50nt，采用測(cè)序策略為50SE。其他三類RNA序列一般大于200，通常在1000以上，可達(dá)幾萬(wàn)，通過(guò)片段化構(gòu)建150PE測(cè)序文庫(kù)。然后小RNA文庫(kù)可以獲得miRNA序列信息，去核糖體的鏈特異性文庫(kù)可以獲得mRNA、lncRNA和circRNA的序列信息。轉(zhuǎn)錄組學(xué)即特定細(xì)胞在某一功能狀態(tài)下轉(zhuǎn)錄出來(lái)的所有RNA的總和，包括mRNA和非編碼RNA。相對(duì)于傳統(tǒng)的芯片雜交平臺(tái)，轉(zhuǎn)錄學(xué)組測(cè)序無(wú)需預(yù)先針對(duì)已知序列設(shè)計(jì)探針。河南轉(zhuǎn)錄組學(xué)技術(shù)
轉(zhuǎn)錄組是特定發(fā)育階段或生理?xiàng)l件下細(xì)胞內(nèi)的完整轉(zhuǎn)錄信息的匯合，表示了基因表達(dá)的中間狀態(tài)。轉(zhuǎn)錄組測(cè)序可以對(duì)所有轉(zhuǎn)錄物進(jìn)行分類、確定基因的轉(zhuǎn)錄結(jié)構(gòu)、量化轉(zhuǎn)錄物的表達(dá)水平。蛋白質(zhì)是生命功能的直接執(zhí)行者，蛋白組是一種細(xì)胞乃至一種生物所表達(dá)的全部蛋白質(zhì)。整合轉(zhuǎn)錄組學(xué)和蛋白質(zhì)組學(xué)的表達(dá)數(shù)據(jù)對(duì)生物樣本進(jìn)行研究，可以從整體上解釋生物學(xué)問(wèn)題，探究生物體生理和疾病機(jī)理等。轉(zhuǎn)錄組學(xué)應(yīng)用于胃腸瘤發(fā)生機(jī)制研究：利用轉(zhuǎn)錄組學(xué)可檢測(cè)瘤細(xì)胞惡化過(guò)程中的RNA（編碼RNA及非編碼RNA）的變化，有助于更好地理解胃腸瘤的發(fā)生機(jī)制。深圳轉(zhuǎn)錄組學(xué)領(lǐng)域轉(zhuǎn)錄組具有組織特異性的特點(diǎn)。
單細(xì)胞轉(zhuǎn)錄組學(xué)測(cè)試步驟：第1步就是把單個(gè)細(xì)胞分選出來(lái)。分選的方式也比較多，物理切割，酶消化，F(xiàn)ACS分選等。假如已經(jīng)分到了一個(gè)單細(xì)胞，跟常規(guī)的轉(zhuǎn)錄組步驟上是一樣的。下一步就是把單細(xì)胞里的RNA提取出來(lái)去建庫(kù)測(cè)序。但是一個(gè)細(xì)胞里的RNA含量是比較少的，難建庫(kù)成功。這個(gè)里面“量”的概念很有意思。比如說(shuō)單細(xì)胞量少，需要特殊處理。因?yàn)閱渭?xì)胞里面RNA的量少，所以說(shuō)整個(gè)富集的過(guò)程中會(huì)出現(xiàn)一部分基因在一個(gè)細(xì)胞里能檢測(cè)到，在另外一個(gè)細(xì)胞里面檢測(cè)不到，而每個(gè)細(xì)胞里面的檢測(cè)存在一個(gè)隨機(jī)性，同時(shí)單細(xì)胞測(cè)序深度比較低，所以說(shuō)分析時(shí)相比于普通轉(zhuǎn)錄組有一些是需要特別注意，但整體的分析思路是類似的。
全轉(zhuǎn)錄組學(xué)測(cè)序技術(shù)優(yōu)勢(shì)：文庫(kù)優(yōu)化：針對(duì)不同長(zhǎng)度的序列采用兩種文庫(kù)構(gòu)建方法，采用去核糖體的鏈特異性文庫(kù)可以獲得mRNA、lncRNA和circRNA的序列信息。數(shù)據(jù)全：全轉(zhuǎn)錄組測(cè)序完成后可獲取4類主要RNA（miRNA，mRNA，lncRNA，circRNA）數(shù)據(jù)，可對(duì)這些數(shù)據(jù)進(jìn)行標(biāo)準(zhǔn)分析及整合分析。關(guān)聯(lián)全：通過(guò)對(duì)mRNA/miRNA/lncRNA/circRN序列測(cè)定及后續(xù)分析，深入開(kāi)展全轉(zhuǎn)錄組調(diào)控網(wǎng)絡(luò)(ceRNA網(wǎng)絡(luò))分析。樣本類型：細(xì)胞，組織，體液、血清、血漿、全血，總RNA等。建議總RNA起始量：＞15μg，濃度≥200ng/μL）。轉(zhuǎn)錄學(xué)組測(cè)序能夠提供更高的檢測(cè)通量。
轉(zhuǎn)錄組學(xué)即特定細(xì)胞在某一功能狀態(tài)下轉(zhuǎn)錄出來(lái)的所有RNA的總和，包括mRNA和非編碼RNA。轉(zhuǎn)錄組學(xué)（transcriptomics），是一門在整體水平上研究細(xì)胞中基因轉(zhuǎn)錄的情況及轉(zhuǎn)錄調(diào)控規(guī)律的學(xué)科。簡(jiǎn)而言之，轉(zhuǎn)錄組學(xué)是從RNA水平研究基因表達(dá)的情況。轉(zhuǎn)錄組即一個(gè)活細(xì)胞所能轉(zhuǎn)錄出來(lái)的所有RNA的總和，是研究細(xì)胞表型和功能的一個(gè)重要手段。轉(zhuǎn)錄組學(xué)（transcriptomics），是一門在整體水平上研究細(xì)胞中基因轉(zhuǎn)錄的情況及轉(zhuǎn)錄調(diào)控規(guī)律的學(xué)科。簡(jiǎn)而言之，轉(zhuǎn)錄組學(xué)是從RNA水平研究基因表達(dá)的情況。轉(zhuǎn)錄組學(xué)測(cè)序必須做生物學(xué)重復(fù)么？河南轉(zhuǎn)錄組學(xué)技術(shù)
RNA-Seq轉(zhuǎn)錄組學(xué)有著巨大的應(yīng)用前景。河南轉(zhuǎn)錄組學(xué)技術(shù)
轉(zhuǎn)錄組及轉(zhuǎn)錄組測(cè)序（RNA-seq）：轉(zhuǎn)錄組即特定細(xì)胞在某一功能狀態(tài)下所能轉(zhuǎn)錄出來(lái)的所有RNA的總和，包括mRNA和非編碼RNA。轉(zhuǎn)錄組測(cè)序（RNA-seq）主要通過(guò)高通量測(cè)序研究特定組織或細(xì)胞在某個(gè)時(shí)期轉(zhuǎn)錄出來(lái)的mRNA的表達(dá)量，進(jìn)而對(duì)相關(guān)基因和表型的關(guān)系進(jìn)行分析。本質(zhì)上講RNA-seq就是在用一種新的方法實(shí)現(xiàn)“基因決定性狀”的經(jīng)典思路。在RNA-seq之前用于研究基因組表達(dá)分析的主要技術(shù)是基因芯片，不過(guò)由于高通量測(cè)序成本的下降，RNA-seq的運(yùn)用愈來(lái)愈普遍。河南轉(zhuǎn)錄組學(xué)技術(shù)
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