定量蛋白質(zhì)組學(xué)分析(QuantitativeProteomics)是對(duì)一個(gè)基因組表達(dá)的全部蛋白質(zhì)或一個(gè)復(fù)雜混合體系內(nèi)所有蛋白質(zhì)進(jìn)行精確鑒定和定量??捎糜诤Y選和尋找任何因素引起的樣本之間的差異表達(dá)蛋白,結(jié)合生物信息學(xué)揭示細(xì)胞生理病理等功能,同時(shí)也可對(duì)某些關(guān)鍵蛋白進(jìn)行定性和定量分析。目前定量蛋白質(zhì)組學(xué)技術(shù)常見標(biāo)記(Label)和非標(biāo)記的(LabelFree)定量策略。定量蛋白質(zhì)組學(xué)技術(shù)常見的幾類主要包括:LabelFree定量蛋白組分析、SILAC與免疫共沉淀蛋白互作分析、MRM/PRM定量蛋白組學(xué)分析、SILAC/Dimethyl標(biāo)記定量蛋白組分析、SWATH定量蛋白組學(xué)、TMT/iTRAQ/multinotch定量蛋白組學(xué)分析。蛋白質(zhì)組學(xué)研究的首要任務(wù)是建立獲取和分析蛋白質(zhì)的常規(guī)、可靠、有效的技術(shù)。北京醫(yī)學(xué)蛋白質(zhì)組學(xué)費(fèi)用
LabelFree(非標(biāo)記蛋白質(zhì)組學(xué)技術(shù)):應(yīng)用:1.需要快速在大量樣本中找到差異表達(dá)的蛋白組合。2.需要在較短時(shí)間以較低成本得到具有提示意義的蛋白表達(dá)數(shù)據(jù)。3.需要檢測(cè)的樣品蛋白含量低。4.需要檢測(cè)相互作用蛋白。技術(shù)特點(diǎn):1.對(duì)質(zhì)譜儀器設(shè)備要求較高,色譜和質(zhì)譜需要同時(shí)有較好的穩(wěn)定性和重復(fù)性。2.需要有特殊的定量分析軟件。3.對(duì)樣品中蛋白質(zhì)總量要求較低,實(shí)驗(yàn)周期短,實(shí)驗(yàn)費(fèi)用低。4.不需要額外并且昂貴的標(biāo)記試劑,排除了標(biāo)記過程帶入實(shí)驗(yàn)誤差的風(fēng)險(xiǎn),同時(shí)也不必考慮標(biāo)記效率的問題。廣東新型修飾蛋白組學(xué)質(zhì)譜分析生物質(zhì)譜技術(shù)是蛋白質(zhì)組學(xué)研究中比較重要的鑒定技術(shù)。
蛋白組學(xué)樣本要求:常規(guī)組織:(心、肝、脾、肺、腎、腸、腦、肌肉等)PBS洗滌去除殘留血液和污染物,剔除無關(guān)的干擾組織(血管、脂肪、結(jié)締組織等);沖洗干凈,用組織剪或手術(shù)刀將組織分離成1cm3左右的小塊;液氮速凍5min,保存于-80℃。軟骨組織:PBS洗滌去除殘留血液和污染物;用手術(shù)刀將軟骨切成1cm3左右的小塊;液氮速凍5min,保存于-80℃。軟體動(dòng)物(吸蟲等)PBS洗滌去除來自宿主的污染;液氮速凍5min,保存于-80℃。蛋白質(zhì)組的研究不但能為生命活動(dòng)規(guī)律提供物質(zhì)基礎(chǔ),也能為眾多種疾病機(jī)理的闡明及攻克提供理論根據(jù)和解決途徑。
LabelFree(非標(biāo)記蛋白質(zhì)組學(xué)技術(shù)):在非標(biāo)記策略的定量模型中,主要涉及兩種不同的算法:其一,以肽段的色譜峰積分面積為基礎(chǔ),通過比較一對(duì)生物樣品中相對(duì)應(yīng)到蛋白質(zhì)酶解多肽的色譜積分面積而得到兩者的相對(duì)豐度;其二,以肽段被質(zhì)譜檢測(cè)的計(jì)數(shù)為基礎(chǔ),通過歸一化來表征被檢測(cè)蛋白質(zhì)的相對(duì)豐度。非標(biāo)記技術(shù)認(rèn)為肽段在質(zhì)譜中被捕獲檢測(cè)的頻率(Counts)與其在混合物中的豐度成正相關(guān),因此蛋白質(zhì)被質(zhì)譜檢測(cè)的計(jì)數(shù)反映了蛋白質(zhì)的豐度,通過適當(dāng)?shù)臄?shù)學(xué)公式可以將質(zhì)譜檢測(cè)計(jì)數(shù)與蛋白質(zhì)的量聯(lián)系起來,從而對(duì)蛋白質(zhì)進(jìn)行定量。蛋白質(zhì)組(Proteome)一詞,源于蛋白質(zhì)(protein)與基因組(genome)兩個(gè)詞的組合。
定量蛋白質(zhì)組學(xué)技術(shù):定量蛋白質(zhì)組學(xué)是蛋白質(zhì)組研究的重要內(nèi)容,通過對(duì)基因表達(dá)產(chǎn)物——蛋白質(zhì)的定量分析,以了解基因在不同的生理、病理和逆境條件下的表達(dá)情況。近年來,隨著非凝膠技術(shù)的發(fā)展,蛋白質(zhì)組學(xué)(“Shotgun”proteomics)技術(shù),特別是多維蛋白質(zhì)鑒定(MultidimensionalProteinIdentification,MudPIT)已成為研究復(fù)雜生物樣本中大規(guī)模蛋白質(zhì)表達(dá)和定性和定量分析的強(qiáng)有力工具。蛋白質(zhì)組學(xué)在醫(yī)學(xué)的研究應(yīng)用:蛋白質(zhì)組學(xué)是研究細(xì)胞、組織或生物體中蛋白質(zhì)組成、定位、變化及其相互作用規(guī)律的科學(xué)。蛋白質(zhì)組的概念與基因組的概念有許多差別。深圳常規(guī)蛋白質(zhì)組學(xué)價(jià)格
蛋白質(zhì)組學(xué)本質(zhì)上指的是在大規(guī)模水平上研究蛋白質(zhì)的特征。北京醫(yī)學(xué)蛋白質(zhì)組學(xué)費(fèi)用
蛋白質(zhì)組學(xué):蛋白質(zhì)組一詞,源于蛋白質(zhì)與基因組兩個(gè)詞的組合,意指“一種基因組所表達(dá)的全套蛋白質(zhì)”,即包括一種細(xì)胞乃至一種生物所表達(dá)的全部蛋白質(zhì)。蛋白質(zhì)組學(xué)本質(zhì)上指的是在大規(guī)模水平上研究蛋白質(zhì)的特征,包括蛋白質(zhì)的表達(dá)水平,翻譯后的修飾,蛋白與蛋白相互作用等,由此獲得蛋白質(zhì)水平上的關(guān)于疾病發(fā)生,細(xì)胞代謝等過程的整體而全方面的認(rèn)識(shí)。蛋白質(zhì)組的研究不只能為生命活動(dòng)規(guī)律提供物質(zhì)基礎(chǔ),也能為眾多種疾病機(jī)理的闡明及攻克提供理論根據(jù)和解決途徑。通過對(duì)正常個(gè)體及病理個(gè)體間的蛋白質(zhì)組比較分析,我們可以找到某些“疾病特異性的蛋白質(zhì)分子”,它們可成為新藥物設(shè)計(jì)的分子靶點(diǎn),或者也會(huì)為疾病的早期診斷提供分子標(biāo)志。確實(shí),那些世界范圍內(nèi)銷路*的藥物本身是蛋白質(zhì)或其作用靶點(diǎn)為某種蛋白質(zhì)分子。因此,蛋白質(zhì)組學(xué)研究不只是探索生命奧秘的必須工作,也能為人類健康事業(yè)帶來巨大的利益。北京醫(yī)學(xué)蛋白質(zhì)組學(xué)費(fèi)用
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