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蛋白質(zhì)是基因功能的執(zhí)行者,蛋白間相互作用構(gòu)成機(jī)體生命活動(dòng)的基礎(chǔ)。當(dāng)體內(nèi)行使特定功能的蛋白發(fā)生變異或濃度異常時(shí),都會(huì)導(dǎo)致疾病的發(fā)生。因此,理論上蛋白類藥物可用于任何發(fā)病機(jī)制清楚、病理學(xué)靶點(diǎn)明確的疾病。蛋白質(zhì)藥物,特別是重組蛋白、工程化抗體等生物技術(shù)藥物取得的良好療效及巨大的經(jīng)濟(jì)效益。重組蛋白藥物主要有多肽類、細(xì)胞因子、血漿蛋白因子、重組酶及融合蛋白等類別。中國重組蛋白藥物市場以仿制藥為主,重組人胰島素、重組干擾素、重組粒細(xì)胞集落刺激因子為市場份額多的重組蛋白藥物,發(fā)展前景廣闊。選擇合適的重組蛋白表達(dá)系統(tǒng),至關(guān)重要。無動(dòng)物源性BMP-8重組蛋白定制
購買的重組蛋白單位一般是 μg,重組蛋白檢測結(jié)果和用量常用單位是 U/mL 或 IU/mL。U是什么?和IU之間有什么差別?它們又是怎么與 μg 進(jìn)行換算的呢?首先,U 是蛋白活性單位,用于計(jì)量蛋白本身的生物學(xué)活性?;钚詥挝恢冈谶m條件下,單位時(shí)間內(nèi)產(chǎn)生單位生物學(xué)效應(yīng)的蛋白量。以酶為例,1961年,國際生物化學(xué)學(xué)會(huì)酶學(xué)委員會(huì)提出采用統(tǒng)一的「國際單位」(IU)來表示酶的活力,在合適條件下,每分鐘內(nèi)催化 1 微摩爾(μmol)底物轉(zhuǎn)化為產(chǎn)物或轉(zhuǎn)化底物中 1 微摩爾的有關(guān)基團(tuán)所需的酶量。即 1 IU=1 U=1 μmol/min。IU 與 μg之間的換算,要引入比活性的概念。比活性是指單位質(zhì)量蛋白的生物學(xué)活性單位,通常用 U/μg 或 μmol/min/μg 表示。以酶為例,在合適條件下,如果 1 μg 酶可以在 1 分鐘內(nèi)催化 1μmol 的底物,那么其比活性就是 1U/μg。比活性是重組蛋白的一項(xiàng)重要指標(biāo)。進(jìn)行比活性項(xiàng)目的檢測,不僅可以反映產(chǎn)品生產(chǎn)工藝的穩(wěn)定情況,而且可以比較不同表達(dá)體系、不同生產(chǎn)廠家生產(chǎn)同一產(chǎn)品的品質(zhì)情況。比活性高說明產(chǎn)品的生產(chǎn)工藝更先進(jìn)、純度更高、質(zhì)量更優(yōu)。無動(dòng)物源性BMP-1重組蛋白定制重組蛋白藥物主要有哪些?
在重組蛋白生產(chǎn)中,酵母表達(dá)系統(tǒng)與大腸桿菌表達(dá)有所不同,大腸桿菌表達(dá)只需將質(zhì)粒/載體轉(zhuǎn)入到宿主菌體內(nèi),其載體攜帶復(fù)制原點(diǎn)隨著宿主染色體的復(fù)制而復(fù)制,可以穩(wěn)定存在。而酵母表達(dá)相對(duì)復(fù)雜,設(shè)計(jì)的質(zhì)粒/載體均不帶有酵母自身復(fù)制原點(diǎn),因此如果直接導(dǎo)入到宿主菌中,不能穩(wěn)定存在。所以必須將質(zhì)粒/載體線性化,以同源重組的方式與宿主菌的染色體進(jìn)行整合,這樣外源基因才能夠穩(wěn)定存在,而且同源重組一旦形成會(huì)很穩(wěn)定,在通過后期的篩選排除沒有整合成功的質(zhì)粒/載體和宿主菌,挑選整合成功并能夠高表達(dá)的重組轉(zhuǎn)化子,某種程度上與哺乳動(dòng)物穩(wěn)定細(xì)胞系構(gòu)建原理類似。
不同表達(dá)系統(tǒng)所生成的重組蛋白間有何主要區(qū)別?以賽默飛為例,Thermo Fisher Scientific? 所提供的重組蛋白產(chǎn)品通常在大腸桿菌,昆蟲細(xì)胞或哺乳動(dòng)物細(xì)胞等不同的表達(dá)系統(tǒng)中產(chǎn)生。不同表達(dá)系統(tǒng)之間產(chǎn)生的重組蛋白的主要差別在于這些蛋白所攜帶的翻譯后修飾,如糖基化修飾。在大腸桿菌中生成的重組蛋白未經(jīng)糖基化。在昆蟲細(xì)胞中產(chǎn)生的重組蛋白通常經(jīng)有部分糖基化,但不含半乳糖和唾液脫鹽酸,糖鏈也無復(fù)雜分支。在哺乳動(dòng)物細(xì)胞中生成的重組蛋白會(huì)發(fā)生附帶完全的糖基化修飾。備注:Mimic? Sf9 昆蟲細(xì)胞(來源于sf9昆蟲細(xì)胞系,經(jīng)改造可穩(wěn)定表達(dá)多種哺乳動(dòng)物糖基轉(zhuǎn)移酶)可產(chǎn)生用于表達(dá)帶末端唾液酸和半乳糖的復(fù)雜的N-糖鏈。選擇重組蛋白定制需謹(jǐn)慎。
ProSpec是一家全球細(xì)胞因子蛋白及相關(guān)抗體生產(chǎn)和研發(fā)品牌。ProSpec的生產(chǎn)和研發(fā)工廠位于以色列,專注于蛋白(重組及合成)生產(chǎn)研發(fā),其獨(dú)有的細(xì)菌和哺乳動(dòng)物表達(dá)和蛋白折疊技術(shù)使其能在17年內(nèi)成長為國際的科研級(jí)蛋白供應(yīng)商。目前ProSpec可以提供細(xì)胞因子,生長因子,信號(hào)蛋白,病毒抗原等近800種重組蛋白和100多種抗體,是世界上提供蛋白品種多的公司之一,其生產(chǎn)工藝和規(guī)模使其可以提供毫克到克級(jí)蛋白,價(jià)格優(yōu)于同類公司。絕大部分產(chǎn)品是天然成熟型蛋白,而不含有標(biāo)簽蛋白??紤]到大部分研究者希望能更靈活地配制蛋白溶液,ProSpec-Tany絕大部分產(chǎn)品沒有添加保護(hù)劑或鹽,這就對(duì)工藝提出了更高的要求。同時(shí),ProSpec-Tany絕大部分產(chǎn)品為凍干粉,因此易于運(yùn)輸和保存。國產(chǎn)重組蛋白品牌有哪些?普欣重組蛋白有哪些
普欣生物是國內(nèi)外多家著名生物試劑公司和臨床診斷公司的重組蛋白OEM供應(yīng)商。無動(dòng)物源性BMP-8重組蛋白定制
客戶購買的重組蛋白一般為裝在塑料管中的凍干粉,凍干粉在運(yùn)輸過程中可能會(huì)因顛簸而漂散并粘貼于管壁或管蓋上,所以在打開塑料瓶蓋前,需將凍干粉通過離心收集到管底,以便用很小體積的液體即可將凍干粉完全溶解。那么應(yīng)該用多少轉(zhuǎn)速、多長時(shí)間離心試劑管,才能達(dá)到良好的收集效果?答:有些小型高速離心機(jī)(多為進(jìn)口品牌)的面板上有一個(gè)Spin鍵,按了此鍵后,離心機(jī)會(huì)自動(dòng)快速上升到速度(10000rpm或12000rpm),上升后速度即刻下降,直至停止旋轉(zhuǎn),整個(gè)過程大約30s。這個(gè)Spin鍵足以很好的將細(xì)胞因子或蛋白收集到管底。但有些實(shí)驗(yàn)室沒有這樣的高速離心機(jī),只有轉(zhuǎn)速為4000-4500rpm的離心機(jī)。這種情況下,需3000-3500rpm離心5min,也能達(dá)到類似的效果。無動(dòng)物源性BMP-8重組蛋白定制
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