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二代測序不同應(yīng)用場景下的速度有多快?
病原微生物檢測:一般來說,二代測序用于檢測病原微生物時(shí),能夠在幾個(gè)小時(shí)到一天左右出結(jié)果。比如在快速檢測血液中的病原微生物時(shí),通??梢栽趲讉€(gè)小時(shí)內(nèi)獲得檢測結(jié)果,相比傳統(tǒng)的血液培養(yǎng)方法,時(shí)間大幅縮短,傳統(tǒng)血液培養(yǎng)一般需要幾天到一周的時(shí)間 。
全基因組測序:如果是對人類全基因組進(jìn)行測序,以目前的技術(shù)水平,使用二代測序技術(shù)完成一個(gè)人的全基因組測序,一般需要 1-2 天左右的時(shí)間。而在十幾年前,人類全基因組測序計(jì)劃***完成時(shí),耗費(fèi)了大量的時(shí)間和精力,相比之下二代測序技術(shù)的速度提升***。
轉(zhuǎn)錄組測序:轉(zhuǎn)錄組測序的時(shí)間相對較短,一般幾個(gè)小時(shí)內(nèi)可以完成對大量 RNA 分子的測序和初步數(shù)據(jù)分析,進(jìn)而快速了解基因在特定條件下的表達(dá)情況8. 二代測序是先打斷DNA,使其片段化。北京嘉安健達(dá)二代測序原理
④二代測序一般多久出結(jié)果?
4、數(shù)據(jù)分析的復(fù)雜程度
數(shù)據(jù)分析是二代測序的重要環(huán)節(jié)。簡單的分析,如檢測已知的單核苷酸多態(tài)性(SNP),可以通過與參考基因組比對后利用一些成熟的軟件快速完成。但如果是進(jìn)行復(fù)雜的分析,如尋找新的基因融合事件、復(fù)雜結(jié)構(gòu)變異的檢測或者進(jìn)行從頭組裝(denovoassembly),則需要更復(fù)雜的算法和更多的計(jì)算資源,花費(fèi)的時(shí)間可能從數(shù)天到數(shù)周。例如,對于常規(guī)的SNP檢測和注釋,數(shù)據(jù)分析可能在1-3天內(nèi)完成;而對于**樣本中復(fù)雜的基因融合分析,可能需要3-7天甚至更長時(shí)間來確保結(jié)果的準(zhǔn)確性。 北京嘉安健達(dá)二代測序原理二代測序的優(yōu)勢是低成本。
二代測序的操作流程有哪些?
1.DNA提取與質(zhì)檢
· 純凈、足量、質(zhì)量好的樣本DNA是檢測成功的基礎(chǔ)(可以來源于血漿、新鮮組織等)
2.DNA處理→文庫構(gòu)建
· 得到統(tǒng)一長度區(qū)間+有接頭的DNA片段
· 步驟:DNA打斷→末端修復(fù)→片段篩選→加A尾→接頭連接→PCR
3.靶向捕獲
· 特定區(qū)域基因的定向檢測
4.上機(jī)測序
· 根據(jù)通量情況選擇測序儀
· 上樣后機(jī)器完成
5.數(shù)據(jù)分析
· 初級分析:光強(qiáng)數(shù)據(jù)(不同熒光標(biāo)記堿基)→序列信息(AGCT)
· 二級分析 多儀器自帶
· 三級分析 vcf文件 可diy
二代測序技術(shù)在不同人群中的準(zhǔn)確性有何差異④
***性疾病患者
優(yōu)勢:病原學(xué)二代測序可準(zhǔn)確檢測病原體的基因序**定病原體種類和基因型,為***性疾病的診斷和***提供依據(jù),在檢測罕見病原體、病毒***等方面具有獨(dú)特優(yōu)勢,有助于快速明確診斷,尤其是對于一些傳統(tǒng)檢測方法難以診斷的***性疾病,如不明原因的發(fā)熱、肺炎、腦膜炎等。
局限性:對于低豐度病原體,可能出現(xiàn)假陽性或假陰性結(jié)果。樣本質(zhì)量、測序深度和數(shù)據(jù)分析方法等因素也會影響準(zhǔn)確性,若樣本中病原體含量低或雜質(zhì)多,可能導(dǎo)致檢測失敗或結(jié)果不準(zhǔn)確 二代測序常用于醫(yī)學(xué)篩查或診斷。
什么樣本可以做二代測序?①
1、血液樣本
全血:這是最常見的樣本類型之一。血液中含有白細(xì)胞,其細(xì)胞核內(nèi)有完整的基因組DNA。通過提取白細(xì)胞中的DNA,可以進(jìn)行全基因組測序、全外顯子組測序等。例如,在遺傳病的基因診斷中,抽取患者的全血,提取DNA后,對與疾病相關(guān)的基因或整個(gè)外顯子組進(jìn)行測序,以尋找致病突變。
血漿/血清:其中含有游離的DNA(cfDNA)和RNA(cfRNA)。在**患者中,腫瘤細(xì)胞會釋放其DNA片段進(jìn)入血液循環(huán),這些cfDNA被稱為循環(huán)**DNA(ctDNA)。通過對血漿中的ctDNA進(jìn)行測序,可以實(shí)現(xiàn)**的早期篩查、***過程中的動態(tài)監(jiān)測等。例如,對于肺*患者,檢測血漿中的ctDNA來追蹤**的基因突變情況,為靶向***提供依據(jù)。 二代測序是2005年以后開始的嗎?什么是二代測序流程
單細(xì)胞測序也是二代測序。北京嘉安健達(dá)二代測序原理
二代測序的應(yīng)用領(lǐng)域有哪些?
基因組學(xué)研究:用于全基因組測序,快速獲取物種的基因組序列信息,研究基因組結(jié)構(gòu)、變異、進(jìn)化等;進(jìn)行全外顯子組測序,重點(diǎn)關(guān)注編碼蛋白質(zhì)的外顯子區(qū)域,發(fā)現(xiàn)與疾病相關(guān)的基因突變。
轉(zhuǎn)錄組學(xué)研究:通過對轉(zhuǎn)錄組進(jìn)行測序,可分析基因的表達(dá)水平、可變剪接、新轉(zhuǎn)錄本發(fā)現(xiàn)等,有助于深入了解基因在不同生理和病理狀態(tài)下的表達(dá)調(diào)控機(jī)制。
疾病診斷與***:在遺傳病診斷中,能夠檢測出導(dǎo)致遺傳病的基因突變,為疾病的診斷、遺傳咨詢和產(chǎn)前診斷提供依據(jù);在**研究中,可分析腫瘤細(xì)胞的基因突變、拷貝數(shù)變異、基因融合等,為**的早期診斷、靶向***和預(yù)后評估提供支持。
藥物研發(fā):用于藥物靶點(diǎn)的發(fā)現(xiàn)和驗(yàn)證,通過分析疾病相關(guān)的基因變異和表達(dá)變化,確定潛在的藥物作用靶點(diǎn);還可進(jìn)行藥物基因組學(xué)研究,預(yù)測患者對藥物的反應(yīng)和不良反應(yīng),實(shí)現(xiàn)個(gè)體化藥物***。
微生物學(xué)研究:對微生物群落進(jìn)行宏基因組測序,無需培養(yǎng)即可分析微生物的種類、豐度和功能基因,了解微生物群落的結(jié)構(gòu)和動態(tài)變化,研究微生物與宿主的相互作用,以及在環(huán)境科學(xué)、農(nóng)業(yè)、醫(yī)學(xué)等領(lǐng)域的應(yīng)用
北京嘉安健達(dá)二代測序原理