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在ELISA中,進行各項實驗條件的選擇是很重要的,其中包括:固相載體的選擇:許多物質(zhì)可作為固相載體,如聚氯乙烯、聚苯乙烯、聚丙酰胺和纖維素等。其形式可以是凹孔平板、試管、珠粒等。常用的是40孔聚苯乙烯凹孔板。不管何種載體,在使用前均可進行篩選:用等量抗原包被,在同一實驗條件下進行反應(yīng),觀察其顯色反應(yīng)是否均一性,據(jù)此判明其吸附性能是否良好。包被抗體(或抗原)的選擇:將抗體(或抗原)吸附在固相載體表面時,要求純度要好,吸附時一般要求PH在9.0~9.6之間。吸附溫度,時間及其蛋白量也有一定影響,一般多采用4℃ 18~24小時。蛋白質(zhì)包被的較適濃度需進行滴定:即用不同的蛋白質(zhì)濃度(0.1、1.0和10μg/ml等)進行包被后,在其它試驗條件相同時,觀察陽性標本的OD值。選擇OD值較大而蛋白量較少的濃度。對于多數(shù)蛋白質(zhì)來說通常為1~10μg/ml。如何選擇高質(zhì)量ELISA試劑盒?東莞ELISA試劑盒一般多少錢
目前應(yīng)用較多的免疫酶技術(shù)是酶聯(lián)免疫吸附實驗(ELISA試劑盒),如果要分類的話,它屬于異相固相酶免疫技術(shù)。所謂異相是指在檢測時不需要將酶標記抗原抗體和游離抗原抗體分開,所謂固相就是指的ELISA試劑盒的96孔板固相載體了。ELISA試劑盒的主要原理:1、包被:抗原或者抗體能以物理性吸附于固相載體表面,可能原理是蛋白質(zhì)和聚苯乙烯表面間的疏水性部分相互吸附,吸附之后能保持抗原抗體反應(yīng)等免疫活性。2、標記:抗原或者抗體可通過共價鍵與酶連接成酶結(jié)合物,而此種酶結(jié)合物仍能保持其免疫活性和酶的催化特點。3、顯色:酶結(jié)合物與相應(yīng)包被在固相載體的抗原或者抗體結(jié)合后,也被固定在固相載體上,加入酶的底物之后可出現(xiàn)顯色反應(yīng),根據(jù)反應(yīng)的顏色深淺可計算抗原或者抗體的相對含量。江門ELISA試劑盒ELISA檢測試劑盒為冷藏(2℃-8℃)保存。
ELISA試劑盒測定:以空白空調(diào)零,450nm波長依序丈量各孔的吸光度(OD值)。 測定應(yīng)在加停止液后15分鐘以內(nèi)進行。ELISA試劑盒運用注意事項:試劑蛻變的痕跡發(fā)色試劑有任何顏色標明發(fā)色劑蛻變,應(yīng)當棄之。0規(guī)范的吸光度(450/630nm)值小于0.5(A450nm<0.5)時,表明試劑或許蛻變。室溫低于20℃或試劑及樣本沒有回到室溫(20~25℃)會導(dǎo)致一切規(guī)范的OD值偏低。在洗板過程中如果出現(xiàn)板孔枯燥的情況,ELISA試劑盒則會出現(xiàn)規(guī)范曲線不成線性,重復(fù)性不好的現(xiàn)象。所以洗板拍干后應(yīng)立即進行下一步操作。
ELISA試劑盒收集標本請按下列流程進行操作:細胞上清標本離心去除懸浮物后即可。血清標本應(yīng)是自然凝固后,取上清,避免在冰箱中凝固血液。血漿標本,推薦用EDTA的方法收集。若待測樣本不能及時檢測,標本收集后請分裝,凍存于-20℃,避免反復(fù)凍融。血清標本不應(yīng)添加任何防腐劑或抗凝劑。標本應(yīng)清澈透明,檢測前樣本中如有懸浮物應(yīng)通過離心去除。請勿使用溶血,或污染的標本檢測,否則結(jié)果將不準確。試劑盒提純方法:對于易揮發(fā)的試劑,如常用的無機酸,有機溶劑等是比較常用的提純方法,根據(jù)沸點的高低選用常壓或減壓蒸餾法。ELISA試劑盒保溫的方式除有的ELISA儀器附有特制的電熱塊外,一般均選用水浴。
ELISA試劑盒用合成的HEV多肽抗原包被微孔板板條,這些多肽是中國型HEV毒株重要氨基酸序列中抗原性很強的肽段。將樣品或標準品加入孔中并孵育,如果其中存在HEVIgM抗體,這些抗體就會與HEV的多肽抗原結(jié)合,并固定在上面,洗板除去其它非特異性抗體和樣品中的其它成份。然后加入羊抗人IgM-HRP(辣根過氧化物酶)酶結(jié)合物,經(jīng)第二次孵育后,酶結(jié)合物就會與初次孵育結(jié)合上的HEVIgM抗體相結(jié)合,洗板除去未結(jié)合的酶結(jié)合物。ELISA試劑盒嚴格按照說明書要求進行標準化操作。ELISA試劑盒不同批次的ELISA試劑在制作進程中很難保證質(zhì)量完全一致。汕頭ELISA試劑盒售價
洗滌酶標板時應(yīng)充分拍干,不要將吸水紙直接放入酶標反應(yīng)孔中吸水。東莞ELISA試劑盒一般多少錢
ELISA法是免疫診斷中的一項新技術(shù),現(xiàn)已成功地應(yīng)用于多種病原微生物所引起的傳染病、寄生蟲病及非傳染病等方面的免疫診斷。也已應(yīng)用于大分子抗原和小分子抗原的定量測定,根據(jù)已經(jīng)使用的結(jié)果,認為ELISA法具有靈敏、特異、簡單、快速、穩(wěn)定及易于自動化操作等特點。不僅適用于臨床標本的檢查,而且由于一整天之內(nèi)可以檢查幾百甚至上千份標本,因此,也適合于血清流行病學(xué)調(diào)查。本法不僅可以用來測定抗體,而且也可用于測定體液中的循環(huán)抗原,所以也是一種早期診斷的良好方法。因此ELISA法在生物醫(yī)學(xué)各領(lǐng)域的應(yīng)用范圍日益擴大。東莞ELISA試劑盒一般多少錢
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